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目的:本课题组前期研究发现牛磺酸可能通过作用于TLR4信号通路相关靶点抑制炎症的过度激活,保护肠道粘膜上皮细胞,并预防仔猪腹泻,然而,对于牛磺酸的具体作用靶点尚不明确。本研究拟采用牛磺酸预处理仔猪空肠粘膜上皮细胞系IPEC-J2细胞,培养基中添加LPS诱导炎症因子释放,通过Western-blot检测TLR4信号转导通路关键因子蛋白表达水平,并结合免疫荧光及通路抑制剂,明确牛磺酸对TLR4受体后作用靶点;揭示牛磺酸对炎症过度激活的抑制机制,为牛磺酸作为一种营养免疫添加剂应用于预防仔猪腹泻提供理论依据。方法:体外培养IPEC-J2细胞,分为空白对照组（C组,1640培养基）、牛磺酸对照组（T组,20 m M牛磺酸+1640培养基）、LPS处理组（L组,10（?）g/ml LPS+1640培养基）、LPS+牛磺酸组（LT组,10（?）g/ml LPS+20 m M牛磺酸+1640培养基）。添加抑制剂后,LPS+NF-κB抑制剂组（L1组,L组+10μmol/L NF-κB抑制剂）LPS+NF-κB抑制剂+牛磺酸组（LT1组,LT组+10μmol/L NF-κB抑制剂）。离心收集细胞通过ELISA方法检测牛磺酸对细胞培养上清液中炎症细胞因子水平的影响,通过q-PCR,Western-blot和免疫荧光方法检测牛磺酸对MyD88依赖途径NF-κB,MAPK和MyD88非依赖途径信号通路相关基因和蛋白表达水平的影响及定位。结果:1.结果表明与C组相比,L组的IFN-β水平极显著升高（p＜0.001）,与L组相比LT组IFN-β水平极显著降低（p＜0.001）,T组与C组相比,IFN-β水平显著升高（p＜0.01）。2.L组的p65、ERK、JNK、p38和IRF3相对mRNA表达量与C组相比极显著升高（p＜0.001）,与L组相比LT组的基因表达水平不同程度降低。3.与C组相比,L组p-p65、p-JNK、p-ERK1/2、p-p38、p-IRF3的平均荧光强度极显著增高（p＜0.001）,而LT组的平均荧光强度极显著低于L组（p＜0.001）,p-ERK1/2的显著低于L组（p＜0.01）,p-p65、p-JNK、p-ERK1/2、p-p38、p-IRF3C组与T组之间均无明显差异（p（?）0.05）。此外,L组的荧光痕迹主要分布在细胞核上,表明LPS可以诱导p-p65、p-JNK、p-ERK1/2、p-p38、p-IRF3发生核转位。4.相比C组,L组的p65相对蛋白表达量显著增高（p＜0.01）,p-p65、p-JNK、p-ERK1/2、p-p38、p-IRF3的极显著增高（p＜0.001）,ERK1/2、IRF3的增高（p＜0.05）,JNK、p38的无明显差异,而LT组的p65相对蛋白表达量显著低于L组（p＜0.01）,p-p65、p-JNK、p-ERK1/2、p-p38、p-IRF3的极显著低于L组（p＜0.001）,ERK1/2的低于L组（p＜0.05）JNK、p38、IRF3的与L组无明显差异。结论:牛磺酸通过MyD88依赖途径NF-κB和MAPK信号通路及MyD88非依赖途径信号通路抑制LPS/TLR4通路的激活,对LPS诱导的细胞损伤有一定程度保护作用。