威宁绵羊和贵州半细毛羊SOCS7、GFAP基因克隆、组织表达及可变剪接体分析

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本试验以6月龄、1周岁和两周岁的威宁绵羊和贵州半细毛羊公母羊为研究对象,利用分子手段对威宁绵羊和贵州半细毛羊JAK/STAT信号转导通路相关基因(SOCS7和GFAP)编码区序列进行克隆,并进行生物信息学性分析。此外,本试验同时采用实时荧光定量PCR的手段对SOCS7和GFAP两个基因在威宁绵羊和贵州半细毛羊不同性别及不同生长阶段心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠及脑组织7个组织中mRNA水平上的表达规律进行探究,以期得到SOCS7和GFAP两个基因在威宁绵羊和贵州半细毛羊各组织内的表达规律。试验的主要研究结果如下:  (1)本试验成功克隆得到威宁绵羊和贵州半细毛羊SOCS7基因的CDS区全序列,并发现了的两种不同的可变剪接体,分别命名为 SOCS7-V1 和SOCS7-V2,进一步对序列进行比对发现两种可变剪接体CDS区长度的不同是由于发生剪接时绵羊SOCS7基因第五外显子和部分第六外显子是否保留所引起的。SOCS7-V1基因CDS区长度为1827bp,编码609个氨基酸,SOCS7-V2基因CDS区长度为1662bp,共编码554个氨基酸,SOCS7-V2相比于SOCS7-V1缺少165bp碱基对,55个氨基酸。通过进一步分析发现,不同的可变剪接体引起了最终翻译出蛋白质的等电点、分子质量、二级结构、三级结构的改变。  (2)本试验成功克隆得到威宁绵羊和贵州半细毛羊GFAP基因的CDS区全序列,威宁绵羊和贵州半细毛羊GFAP基因CDS区序列长度为1407bp,共编码469个氨基酸。  (3)通过对威宁绵羊和贵州半细毛羊的SOCS7基因两种可变剪接体在mRNA水平上的表达规律的探索发现,SOCS7基因两种可变剪接体在威宁绵羊及贵州半细毛羊中均有不同程度的表达,其中SOCS7基因两种可变剪接体在威宁绵羊和贵州半细毛羊中表达量总体规律几乎一致,即在脾脏内相对表达量最高,其次是肺脏、肾脏、心脏、肝脏和脑组织等组织,威宁绵羊和贵州半细毛羊SOCS7基因在不同性别、不同生长阶段相同组织中的表达具有一定的显著性差异,并且随着威宁绵羊和贵州半细毛羊年龄的增大,其SOCS7基因可变剪接体在组织中的相对表达量呈现小幅度上升的趋势。威宁绵羊和贵州半细毛羊公羊在脾脏、心脏、肺脏、肝脏和脑组织五个组织中SOCS7基因表达量都略低于母羊。  (4)通过对威宁绵羊和贵州半细毛羊的GFAP基因在mRNA水平上的表达规律的探索发现,GFAP基因在威宁绵羊及贵州半细毛羊中均有不同程度的表达,但是威宁绵羊和贵州半细毛羊GFAP基因仅在脑组织中相对表达量最高,其余组织中表达量极低。
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