慢性高血压或急性心肌梗死所导致的心脏重构是心力衰竭的主要危险因素之一[1],肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)在调节血压方面起着主要的作用,这种作用主要通过血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)来实现;血管紧张素Ⅱ能够升高血压,并通过长效作用最终导致器官损坏;过度的RAAS活动是高血压、心衰以及其他相关心血管疾病的一个主要的潜在病因[3]。同时,血管紧张素Ⅱ能够引起心肌细胞的凋亡和肥大[4-6],心脏血管新生在心肌肥厚的适应性机制中起着至关重要的作用[2]。然而,血管紧张素Ⅱ与心肌微血管内皮细胞之间的关系却不是很明确。　　 本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ对心肌微血管内皮细胞和心力衰竭的影响及其可能的机制,为临床治疗存在过度活跃RAAS的心肌肥厚和心力衰竭提供新的思路。实验共分为以下三个部分:　　 第一部分:取8～9周龄的Wistar雄性大鼠作细胞原代培养的取材动物,利用心肌植块法培养大鼠心肌微血管内皮细胞(MMVEC),通过免疫荧光染色法鉴定心肌微血管内皮细胞vWF的表达,来确定心肌植块法培养的心肌微血管内皮细胞的纯度。结果显示:此法培养的心肌微血管内皮细胞纯度较高,在95％左右。另外,通过体外血管形成实验来鉴定心肌微血管内皮细胞的功能,结果显示,此法培养的心肌微血管内皮细胞在Matrigel上具有体外形成管腔样结构的能力,能够用于进一步的实验研究。　　 第二部分:采用心力衰竭的危险因素——血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预心肌微血管内皮细胞,观察心肌微血管内皮细胞发生的分子生物学变化。采用一定浓度的AngⅡ、不同的干预时间对心肌微血管内皮细胞进行干预,主要观察了两个分子:细胞增殖相关蛋白激酶(ERK)和细胞死亡相关分子(p53)的表达变化。结果提示:1.10-7M血管紧张素Ⅱ干预心肌微血管内皮细胞5分钟、10分钟时,ERK的磷酸化水平明显升高,与非干预组相比具有统计学差异(p＜0.05):2.10-6M血管紧张素Ⅱ干预心肌微血管内皮细胞30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时,虽然与非干预组相比没有统计学差异,但p53 mRNA表达增加。因此,我们推测短暂、低浓度的AngⅡ干预可能对心肌微血管内皮细胞起到了一种保护作用,长时间的AngⅡ干预可能对心肌微血管内皮细胞起到了一种损伤作用,并且推测p-ERK可能通过抑制p53的表达来起作用的。因此,我们阻断ERK,观察了P53mRNA的表达变化,并没有发现两者之间存在什么必然的联系。　　 第三部分,在观察AngⅡ干预心肌微血管内皮细胞发生的分子生物学变化的同时,还相应地观察了MMVEC形成管腔样结构的功能变化。实验结果显示:用血管紧张素Ⅱ持续干预18小时,心肌微血管内皮细胞形成管腔样结构的数量明显减少,与非干预组相比具有明显的统计学差异(p＜0.01);单纯血管紧张素Ⅱ持续干预18小时组与前处置5分、10分钟后再干预18小时组相比,心肌微血管内皮细胞形成管腔样结构的数量明显减少、或基本上不形成管腔样结构,两组相比具有统计学差异(p＜0.05)。进一步提示:血管紧张素Ⅱ干预能够引起心肌微血管内皮细胞的功能障碍,短暂、低浓度的AngⅡ干预可能对心肌微血管内皮细胞起到了一种代偿性的保护作用,长时间的AngⅡ干预对心肌微血管内皮细胞起到了一种损伤作用。　　 综上所述,本研究结果提示:持续血管紧张素Ⅱ干预明显降低培养心肌微血管内皮细胞形成管腔样结构的完整性及其数量,其机制可能与增加p53的表达有关;短期低浓度的血管紧张素Ⅱ前处置培养心肌微血管内皮细胞明显改善持续血管紧张素Ⅱ干预后细胞形成管腔样结构能力的下降,其机制可能与短期升高细胞内蛋白激酶ERK的活性进而起到细胞保护作用有关,但蛋白激酶ERK所起的这种保护作用并不是通过抑制p53的表达来发挥的。