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细胞电化学传感器由于不仅能够实现对分析物快速、灵敏的检测而且能够实现对分析物实时、动态的监测,已成为分析化学的一大热点领域。在其发展过程中,构建高选择性、高灵敏度以及较长使用寿命的细胞传感器一直是我们的目标。其中在电极表面构建各种不仅能有效固定细胞而且能很好的保持固定细胞活性的生物相容性的膜是实现这一目标的前提。酶联免疫技术与细胞传感技术的结合,可简单实现细胞表面物质如糖蛋白、醣类化合物等的检测,这更进一步推动了细胞电化学传感器的发展。然而,在电化学免疫分析中,膜对抗体的非特异性吸附是影响检测灵敏度的一个不可忽略的因素。这就又对生物相容性膜的构建提出了新的要求,即具有较强的抗非特异性吸附的能力。本文以有利于细胞固定及有效抑制P-糖蛋白非特异性吸附的生物相容性界面的构建为中心,开展了以下两个方面的研究工作:
㈠基于生物兼容性的PDMS-PDDA复合膜的细胞传感器。通过简单的物理方法构建了一种生物相容性的界面,该界面不仅能有效的捕获人类胃癌细胞(BGC823细胞)而且能有效维持粘附在其上的细胞的活性。基于此,结合免疫方法,我们灵敏的检测了BGC823细胞的数目。该膜制备简单、花费少,仅采用旋涂的方法将掺杂了聚二烯丙基二甲基胺(PDDA)的聚二甲基硅氧烷(PDMS)薄膜(PDMS-PDDA)修饰到金电极上。通过细胞培养实验和电化学实验分别验证了该复合膜的生物兼容性及电化学探针[Fe(CN)6]3-/4-的传输能力。相比于纯的PDMS薄膜和掺杂了聚苯乙烯磺酸钠(PSS)的PDMS复合膜,PDMS-PDDA复合膜由于PDDA所带正电荷和细胞表面多糖类物质所带负电荷的相互作用展示了显著的捕获细胞的能力。由于采用了能生成生物沉淀的免疫反应来放大检测信号,我们用示差脉冲伏安法检测了细胞数量和监测了其在界面上的粘附、增殖和编程性死亡等生长状态。与交流阻抗法相比该方法快速、对细胞在表面的状态影响小。在最优条件下,细胞浓度的检测范围是1.0×103-5.0×107 cells mL-1,最低检测限为7.2×102cells mL-1。
㈡基于PDMs-PDDA复合膜的细胞表面糖蛋白的检测。PDMS-PDDA复合膜除具有良好的生物兼容性外,还展示了有效的抑制BSA、P-糖蛋白抗体及其二抗的非特异性吸附能力。通过电化学实验验证了该膜良好的抑制非特异性吸附的能力。基于该性质,我们结合一步免疫反应的紫外可见光谱法检测了BGC823细胞表面的糖蛋白,每个单细胞表面的P-糖蛋白的分子数约为4.7×107。结果表明该复合膜在评估活细胞表面的糖蛋白方面具有潜在的应用价值。