黄粉虫(TenebriomolitorL.)在昆虫分类学上隶属于鞘翅目，拟步行虫科，粉虫甲属。目前有关研究已经证明，黄粉虫体内含有多种重要生物活性物质，包括蛋白质、氨基酸、脂肪、微量元素和维生素等;大量实验也证明，以黄粉虫为原料制成的保健品具有提高人体免疫力、抗疲劳、降低血脂、抗癌以及促进新陈代谢等功效。目前，国内主要在其生物学特性和人工养殖技术方面有所研究，作为一种高蛋白营养品，对其功能性蛋白的研究较为罕见。国外对该虫已引起广泛关注，已有对其消化酶的有关研究，和少量关于其具有抑菌和溶血栓作用方面的工作，但对黄粉虫胰蛋白酶样酶的提取、功能以及其基因方面的研究尚少，而对该基因的克隆表达的研究还未见报道。本论文的研究是在课题组前期对其纤溶酶基因进行克隆的基础上，进一步探讨黄粉虫丝氨酸胰蛋白酶样酶(TMTLSP)基因克隆并在毕赤酵母中表达。毕赤酵母是一种甲基营养型酵母，具有高效表达外源蛋白的能力、完善的分泌系统和翻译后加工机制，适于表达真核蛋白。　　 本文采用了PCR技术，以含有TMTLSPcDNA的质粒作为模板，扩增出TMTLSP基因片段;将克隆获得的目的基因插入到毕赤酵母表达载体pPIC9K中，经测序无误后，获得重组表达质粒pPIC9K-TMTLSP;将重组表达质粒线性化后电击转化到毕赤酵母GS115中，经筛选并PCR验证获得多拷贝整合型酵母工程菌;对工程菌进行发酵，甲醇诱导表达，取样进行SDS-PAGE分析，结果显示在26KD左右有阳性条带，而空质粒转化子没有;经纤溶平板实验验证，该表达蛋白具有生物活性。　　 黄粉虫纤溶酶为一种新型强溶栓蛋白酶，开展对其真核生物基因表达的研究具有重要意义，本研究的实施构建了真核表达黄粉虫胰蛋白酶样酶工程菌，为一种新型溶栓基因工程药物的诞生奠定重要的理论与实验基础。