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纳米粒了是指尺寸在在1～100nm之间的颗粒材料,其独特的物理化学特性已经引起了人们的极大研究兴趣。纳米技术是推动当今医学发展的主要动力之一,在肿瘤防治方面的工作已成为目前研究的热点。 纳米羟基磷灰石抗肝癌的应用,得到了越来越多的关注。本课题选用均匀沉淀法、溶胶-凝胶法制备了四种不同粒径的纳米羟基磷灰石,并应用激光粒度分析仪、X-射线衍射、傅立叶红外光谱仪、透射电镜及其电子衍射技术对其粒径、结晶度、成分、形貌等进行了表征。结果显示:纳米羟基磷灰石的粒径分别是59.9nm、170.7nm、288.9nm和421.1nm;红外光谱测试含有羟基磷灰石的特征吸收峰;随着粒径的逐渐增大,其结晶度越来越高,相应x-射线衍射的峰值越尖锐;透射电镜观察分散性越差的颗粒,电子衍射环越清晰。 将制备的四种不同粒径的纳米羟基磷灰石,各以三种浓度通过MTT法进行体外抗人肝癌细胞的筛选,结果显示,肝癌细胞对59.9nm的纳米羟基磷灰石高度敏感,为非细胞毒介导的生长抑制效应,抑制率最高可达70%以上,面对人肝细胞的抑制作用明显降低(P<0.01);肝癌细胞对l70.7nm纳米羟基磷灰石比较敏感,但与前者(59.9nm)组比较具有显著性差异(P<O.01)。应用生长曲线及倍增时间测定、集落形成率测定和一般形态学观察,发现59.9nm的纳米羟基磷灰石可使肝癌细胞的生长曲线上升缓慢,倍增时间延长,集落形成减少,这些变化与纳米羟基磷灰石未处理纰比较都具有统汁学的差异(P<O.05);面对肝细胞的作用不明显(P>0.05)。 首次采用透射电镜及其电子衍射技术定性研究了细胞内的纳米羟基磷灰石成分,发现外源性的纳米羟基磷灰石能够进入细胞内,并且首次发现其定位于内质网。进一步应用激光共聚焦显微镜技术定量检测了细胞内质网的变化,结果显示:肝痛细胞的内质网含量低于肝细胞(P<0.01);肝癌痛细胞经纳米羟基磷灰石作用后,内质网的含量降低(P<0.05),而肝细胞则变化不显著(P>0.05)。 应用琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测初步排除了肌癌细胞的凋亡,吖啶橙荧光染色、透射电镜观察,首次提出肝癌细胞的死亡方式为非凋亡性程序性死亡,而且与caspase-9的活性升高有关;进一步研究c-myc、p53的mRNA表达,纳米羟基磷灰石抑制c-myc的表达、上调p53的表达,使肝癌细胞阻滞于