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目的：鉴定hsa-miR-181a的靶基因,探索hsa-miR-181a在慢性髓细胞性白血病K562细胞的作用及机制,为白血病分子靶向治疗提供新的实验依据。方法：(1)在前期研究中,将化学合成的hsa-miR-181 a mimics转染K562细胞,采用Human1A全基因组寡核苷酸芯片(Agilent公司)杂交,共检测出差异表达基因228个,其中下调基因169个。本研究以此为基础结合生物信息学方法(MicroCosm和TargetScan软件)筛选hsa-miR-18la的候选靶基因。(2)本课题选择候选基因中已知与肿瘤关系密切的RALA基因进行深入研究。通过脂质体LipofectamineTM2000介导,将化学合成的hsa-miR-181a mimics和候选靶基因RALA siRNA分别转染K562细胞。(3)Real-time PCR检测K562细胞内RALAmRNA的表达水平。(4)Western blot检测K562细胞内RALA蛋白的表达水平。(5)构建RALA 3’UTR和RALA mut-3’UTR的双荧光素报告基因载体,并进行荧光素酶活性分析hsa-miR-181 a与RALA的结合。(6)MTT法检测hsa-miR-181a和]RALA siRNA对K562细胞生长的影响。(7)Annexin V-PI双染检测hsa-miR-181 a和RALA siRNA对K562细胞凋亡的影响。(8)PI单染流式细胞仪检测hsa-miR-18 1a;和RALA siRNA对K562细胞周期的影响。(9)Hoechest33258染色观察转染hsa-miR-181a mimics和RALA siRNA后K562细胞的形态学变化。结果：(1)利用基因芯片和生物信息学方法筛选出hsa-miR-181a的3个候选靶基因RALA、PLCL2和SEMA4C。(2)hsa-miR-181a mimics和RALA siRNA:转染K562细胞48h后,Real-time PCR分析RALA mRNA表达结果显示：miR-181a组和RALAsiRNA组细胞内RALA mRNA表达明显下调。(3)hsa-miR-181a mimics和RALA siRNA转染K562细胞48h后,Westem blot分析RALA蛋白表达结果显示：miR-181a组和RALA siRNA组细胞内RALA蛋白表达明显下调。(4)荧光素酶活性分析结果发现RALA 3’UTR中带有明确的hsa-miR-181a结合位点,RALA受hsa-miR.181a的调控。(5)hsa-miR.181a mimics和RALA siRNA转染K562细胞48h后,MTT法检测显示：miR-181a组和RALA siRNA组细胞的生长受到明显抑制。(6)hsa-miR-181a mimics和RALA siRNA转染K562细胞48h后,Annexin V-PI双染检测结果显示：miR-181a组和RALA siRNA组细胞出现明显的早期凋亡细胞群。(7)hsa-miR-181a mimics和RALA siRNA转染K562细胞48h后,PI单染检测结果显示：miR-181a组和RALA siRNA组G2期细胞比例明显增高.(8) hsa-miR-181a mimics和RALA siRNA转染K562细胞48h后,Hoechest33258染色可见miR-181a组和RALA siRNA组细胞出现核固缩、边聚和裂解、凋亡小体形成等凋亡形态学变化。结论：1.基因芯片技术结合生物信息学分析是筛选miRNA候选靶基因的有效方法之一2.在K562细胞中,癌基因RALA是hsa-miR-181a直接的功能性靶基因之一,hsa-miR-181a可以通过降解RALA mRNA的方式来调控RALA的表达。3. hsa-miR-181a部分地通过靶向RALA影响慢性髓细胞性白血病K562细胞的生长、细胞周期和凋亡,可能是白血病中一个重要的抑癌基因。