环孢素(Cyclosporin)化学名为环[(E)-(2S，3R，4R)-3-羟基-4-甲基-2-（甲氨基）-6-辛烯酰]-L-2氨基丁酰-N-甲基甘氨酰-N-甲基-L-亮氨酰-L-缬氨酰-N-甲基-L-亮氨酰-L-丙氨酰-D-丙氨酰-N-甲基-L-亮氨酰-N-甲基-L-亮氨酰-N-甲基-L-缬氨酰]。　　环孢素为免疫抑制剂，对T细胞依赖性免疫反应作用强。它与T细胞胞浆受体蛋白cyclophilin形成复合物，再与钙调磷酸酶结合，抑制该酶活性，进而抑制T细胞对特异性抗原刺激反应。本品还可通过促进转化生长因子β(TGF-β)的表达，抑制细胞因子Ⅰ L-2的产生和释放，阻止有赖于ⅠL-2的T细胞增殖和功能，并减少细胞毒T细胞(CTL)的产生。减少炎症性细胞因子如ⅠL-1和TNF-α释放，抑制干扰素生成及自然杀伤细胞(NK)功能。本品除抑制T细胞活化外，还可干扰多种细胞的生长和功能如角质细胞，成骨细胞等。环孢素的出现是20年来器官移植的最重大进展。　　环孢素A于1969年首先从真菌cylindrocarponlucidum和beaueriabassiana发酵液中提取，1978首次进行了环孢素第一期临床试验，1983年Sandoz公司在瑞士以商品名Sandimmun上市，同年美国FDA批准了该药。　　主要研究分为三部分:　　第一部分、环孢素胶囊的质量标准研究　　目的:通过对环孢素胶囊的性状、鉴别、溶出度、水分、有关物质及含量测定的研究，为其质量标准的制定提供理论依据。　　方法:　　1.性状:采用目视法对环孢素胶囊的内容物进行了测定。　　2.鉴别:分别采用薄层色谱法和高效液相色谱法对其进行鉴别。　　3.检查:水分的测定法按照中国药典2010年版二部附录ⅧM第一法A；溶出度测定法（附录XC第一法）进行检查，以0.1mol/L盐酸溶液（含1.0％的十二烷基硫酸钠）1000ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经60分钟时，取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。有关物质采用高效液相色谱法测定。　　4.含量测定:采用高效液相色谱法。含量测走:采用高效液相法测量本品含量。十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Merck Hibar(R)250-4，6，LiChrospher(R)100，RP-18e（5μm）），在用色谱柱与进样阀之间连接一根∮0.25mm×1m的不锈钢管作为热交换器（或使用具有预加热模块的柱温箱），以四氢呋喃-60mmol/L磷酸溶液(45∶55)为流动相，流速为每分钟1.2ml，不锈钢管温度与柱温均为75℃，检测波长220nm。a.回收率试验:精密称取环孢素对照品，分别置25ml量瓶中，按处方配置样品溶液，用四氢呋喃-水(80∶20)稀释制成测定浓度的80％、100％、120％的溶液，按上述条件进行分析，计算回收率。b.重复性试验:取样品一批，按拟定质量标准制备对照品溶液和供试品溶液，按拟定方法项下的色谱条件进行分析，重复测定样品6次。c.溶液稳定性试验:取样品一批，按拟定质量标准制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8h，测定峰面积。d.样品测定:按已确定方法，测定环孢素胶囊的含量。　　结果:　　1.环孢素胶囊内容物为白色或类白色粉末。　　2.鉴别:TLC鉴别试验表明供试品溶液所显示主斑点的位置、颜色、大小与环孢素对照品溶液相同;HPLC法色谱图中供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰保留时间一致。　　3.检查:依法对水分，溶出度进行检查均符合规定;有关物质采用高效液相色谱法进行测定。有关物质采用高效液相色谱法进行测定。 a.系统适用性:理论板数按环孢素峰计算应不低于5000。b.检测波长定为220nm。c.专属性试验:①辅料干扰:按各企业处方配制空白辅料溶液，结果辅料不干扰测定。国产样品的胶囊壳在约4分钟处，均出现一较大色谱峰。②破坏性试验:同环孢素注射液，结果显示环孢素与各降解产物分离良好。　　4.含量测定:采用高效液相色谱法测定本品的含量。a.回收率试验:精密称取环孢素对照品，分别置25ml量瓶中，按各处方配置样品溶液，用四氢呋喃-水(80∶20)稀释制成测定浓度的80％、100％、120％的溶液，按上述条件进行分析，计算回收率，结果均符合规定。b.重复性试验:取样品一批，按拟定质量标准制备对照品溶液和供试品溶液，按拟定方法项下的色谱条件进行分析，重复测定样品6次，结果平均含量为97.4％，RSD值为0.1％。c.溶液稳定性试验:取样品一批，按拟定质量标准制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8h，测定峰面积，峰面积RSD为0.2％，结果表明，供试品溶液在8小时内稳定。　　结论:通过对环孢素胶囊的性状、鉴别、水分、溶出度、有关物质及含量测定方法的全面研究，建立了一整套操作简便、灵敏度高、专属性强、结果准确的药物分析方法，为环孢素胶囊质量标准的建立提供了科学的依据。　　第二部分、环孢素软胶囊质量标准的方法学研究　　目的:建立HPLC法测定环孢素软胶囊的含量及有关物质，建立环孢素软胶囊的溶出度测定方法，建立气相色谱法测定环孢素软胶囊中乙醇和丙二醇的含量。　　方法:　　1.性状:对外观进行测定。　　2.检查:对油滴直径，内容物的澄清度进行检查，有关物质采用高效液相色谱法测定，方法同含量测定项下;有机溶剂残留量对乙醇与丙二醇的残留量进行考察，残留溶剂的测定方法:乙醇与丙二醇含量照气相色谱法（中国药典2010年版二部附录VE）测定。使用以聚乙二醇为固定相的毛细管柱;柱温40℃保持3分钟，以每分钟10℃的速率升至90℃，再以每分钟5℃的速率升至200℃;采用氢火焰离子化检测器;检测器温度为280℃;进样口温度为210℃;载气为氮气。　　3.含量测定:采用高效液相法测量本品含量。十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Merck Hibar(R)250-4，6，LiChrospher(R)100，RP-18e(5μm)），在用色谱柱与进样阀之间连接一根∮0.25mm×1m的不锈钢管作为热交换器（或使用具有预加热模块的柱温箱），以四氢呋喃-60mmol/L磷酸溶液(45∶55)为流动相，流速为每分钟1.2ml，不锈钢管温度与柱温均为75℃，检测波长220nm。a.回收率试验:精密称取环孢素对照品，分别置25ml量瓶中，按各处方配置样品溶液，用四氢呋喃-水(80∶20)稀释制成测定浓度的80％、100％、120％的溶液，按上述条件进行分析，计算回收率。b.重复性试验:取样品一批按拟定质量标准制备对照品溶液和供试品溶液，按拟定方法项下的色谱条件进行分析，重复测定样品6次。c.溶液稳定性试验:取样品一批，按拟定质量标准制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8h，测定峰面积。d.依据上述含量测定方法，测定环孢素软胶囊的含量。　　结果:　　1.性状:内容物为淡黄色至黄色的油状透明液体。　　2.鉴别:高效液相色谱图中供试品溶液主峰和对照品溶液主峰保留时间一致。　　3.检查:依法对油滴直径，内容物的澄清度，溶出度进行检查均符合规定；有关物质采用高效液相色谱法进行测定。a.系统适用性:理论板数按环孢素峰计算应不低于5000。b.检测波长定为220nm。c.专属性试验:①辅料干扰:按各企业处方配制空白辅料溶液，结果辅料不干扰测定。国产样品的胶囊壳在约4分钟处，均出现一较大色谱峰。②破坏性试验:同环孢素注射液，结果显示环孢素与各降解产物分离良好。　　4.含量测定:采用高效液相色谱法测定本品的含量。a.回收率试验:精密称取环孢素对照品，分别置25ml量瓶中，按各处方配置样品溶液，用四氢呋喃-水(80∶20)稀释制成测定浓度的80％、100％、120％的溶液，按上述条件进行分析，计算回收率，结果均符合规定。b.重复性试验:取样品一批，按拟定质量标准制备对照品溶液和供试品溶液，按拟定方法项下的色谱条件进行分析，重复测定样品6次，结果平均含量为97.4％，RSD值为0.1％。c.溶液稳定性试验:取样品一批，按拟定质量标准制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8h，测定峰面积，峰面积RSD为0.2％，结果表明，供试品溶液在8小时内稳定。　　结论:通过对环孢素软胶囊的性状、鉴别、溶出度、有关物质、残留溶剂及含量测定方法的全面研究，建立了一整套操作简便、灵敏度高、结果准确的药物分析方法，为环孢素软胶囊质量标准的建立提供了科学的依据。　　第三部分、环孢素注射液的质量标准研究　　目的:通过对环孢素注射液的性状、鉴别、酸碱度、澄清度与颜色、不溶性微粒、乙醇量、有关物质及含量测定的研究，为其质量标准的制定提供理论依据。　　方法:　　1.性状:采用目视法对环孢素注射液进行了测定。　　2.鉴别:高效液相色谱法对其进行鉴别。　　3.检查:酸度，澄清度与颜色，不溶性微粒，乙醇量按照中国药典2010年版二部附录进行检查;有关物质采用高效液相色谱法测定。　　4.含量测定:采用高效液相色谱法。十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Merck Hibar(R)250-4，6，LiChrospher(R)100，RP-18e（5μm）），在用色谱柱与进样阀之间连接一根∮0.25mm×1m的不锈钢管作为热交换器（或使用具有预加热模块的柱温箱），以四氢呋喃-60mmol/L磷酸溶液(45∶55)为流动相，流速为每分钟1.2ml，不锈钢管温度与柱温均为75℃，检测波长220nm。a.回收率试验:精密称取环孢素对照品，分别置25ml量瓶中，按处方配制样品溶液，用四氢呋喃-水(80∶20)稀释制成测定浓度的80％、100％、120％的溶液，按上述条件进行分析，计算回收率。b.重复性试验:取样品一批，按拟定质量标准制备对照品溶液和供试品溶液，按拟定方法项下的色谱条件进行分析，重复测定样品6次。c.溶液稳定性试验:取样品一批，按拟定质量标准制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8h，测定峰面积。d.样品测定:按已确定方法测定环孢素注射液含量。　　结果:　　1.本品为微黄色至黄色的澄明油状液体。　　2.鉴别:HPLC法色谱图中供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰保留时间一致。　　3.检查:依法对酸度，澄清度与颜色，不溶性微粒进行检查均符合规定；乙醇量采用气相色谱法进行测定;有关物质采用高效液相色谱法进行测定。a.理论系统适用性:理论板数以环孢素峰计算为8900，环孢素C峰与环孢素B峰的分离度为7.18，环孢素G峰与环孢素H峰的分离度为2.39，异环孢素H峰与异环孢素A峰的分离度为2.96，环孢素B峰与环孢素峰的分离度为2.41，环孢素峰与环孢素G峰的分离度为2.88，环孢素H峰与异环孢素H峰的分离度为10.51。b.线性关系与范围:分别精密称取环孢素和各杂质对照品适量，配制成系列浓度溶液，绘制标准曲线。c.定量限:采用逐步稀释法测定，以S/N=10时计算环孢素和6个已知杂质的定量限。d.校正因子:精密称取环孢素对照品和各杂质对照品，配制限度浓度的对照品溶液，计算个杂质的校正因子。 e.专属性试验:①辅料干扰:按处方配制空白辅料溶液，辅料不干扰测定。②破坏性试验:精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，分别进行强酸、强碱、氧化、高温和光照破坏性试验，再用四氢呋喃-水(80∶20)稀释至刻度。取上述专属性试验样品溶液，分别进样，记录色谱图，结果显示环孢素与各降解产物分离良好。　　4.含量测定:a.回收率试验:精密称取环孢素对照品，分别置25ml量瓶中，按处方配置样品溶液，用四氢呋喃-水(80∶20)稀释制成测定浓度的80％、100％、120％的溶液，按上述条件进行分析，计算回收率。b.重复性试验:取样品一批，按拟定质量标准制备对照品溶液和供试品溶液，按拟定方法项下的色谱条件进行分析，重复测定样品6次，结果平均含量为97.4％，RSD值为0.1％。c.溶液稳定性试验:取样品一批，按拟定质量标准制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8h，测定峰面积，平均峰面积为16499，RSD为0.3％，结果表明，供试品溶液在8小时内稳定。d.依据上述方法测定环孢素注射液含量。　　结论:通过对环孢素注射液的性状、鉴别、酸度、澄清度与颜色、不溶性微粒、乙醇量、有关物质及含量测定方法的全面研究，建立了一整套操作简便、灵敏度高、专属性强、结果准确的药物分析方法，为环孢素注射液质量标准的建立提供了科学的依据。