目的：优选哈蟆油水溶性总蛋白提取工艺，测定其理化性质，并通过药理实验研究其药理活性，为我国特产名贵中药材哈蟆油研究提供新的依据和技术支撑。　　方法：以总蛋白得率为评价指标，采用不同pH缓冲溶液、不同料液比、不同浸提时间、不同浸提次数、浸提液不同含盐浓度的单因素试验及正交试验优选哈蟆油水溶性总蛋白的最佳提取工艺，并结合细胞增殖活性及抗氧化、抗疲劳药理实验对其进行性质研究。　　结果：　　1、优化后哈蟆油水溶性总蛋白的提取工艺为：用pH为6.5，含盐0.5 M的浸提液，以料液比1：100浸提哈蟆油原药材3次，每次浸提时间为6 h。　　2、验证试验结果表明，最终哈蟆油水溶性总蛋白收率为9.97％以上，蛋白纯度为86%，分子量主要分布在135 kDa、49 kDa、14 kDa及9 kDa左右。　　3、细胞活性实验表明，哈蟆油水溶性总蛋白对L-929、Vero及ChL细胞增值具有促进作用，而对3T3细胞增值具有抑制作用，且活性呈现一定量效关系。　　4、抗氧化实验表明，哈蟆油水溶性总蛋白能够提高肝脏与血清中超氧化物歧化酶（SOD）含量，并能显著降低肝脏与血清中过氧化脂质（MDA）含量。　　5、抗疲劳实验表明，哈蟆油水溶性总蛋白可延长小鼠负重游泳时间，降低血清尿素氮含量，显著增加肝糖原含量和降低血乳酸含量，但对小鼠的体重无明显影响。　　结论：　　1、采用本实验优选的提取工艺，哈蟆油水溶性总蛋白收率及纯度较高。　　2、哈蟆油水溶性总蛋白可促进成纤维细胞、肾细胞及肺细胞生长，抑制胚胎成纤维细胞生长。　　3、哈蟆油水溶性总蛋白具有较明显的抗氧化能力且具一定的抗疲劳能力。