本研究在2006—2007年从山东省分离到10株肾型IBV,并通过电镜形态观察、致鸡胚矮小化试验、病毒干扰试验、血凝试验、动物回归试验以及分子生物学试验等方法对其进行了鉴定,同时对病毒基因组中的核蛋白基因序列进行了测定、分析和比较,以说明山东省肾型IBV毒株之间以及与参考毒株之间基因的遗传变异情况,同时构建系统进化树,分析山东省肾型IBV分离株与参考株之间的系统进化关系,探讨山东省肾型IB流行的背景和原因。现地濒死病鸡病变组织处理后接种9～11日龄SPF鸡胚,接种鸡胚后72h内收集尿囊液,同时观察胚体病变。传3～7代后,发现死亡鸡胚表现出生长发育障碍(侏儒胚),胚体弥漫性出血,尤其是头部出血比较明显,未死亡鸡胚呈现典型的卷曲胚。病毒尿囊液对鸡外周血红细胞无凝集活性。病毒尿囊液在电镜下表现为病毒粒子大多呈球形,直径约为80～120nm,有囊膜,表面有松散、均匀排列的冠状突起,呈现典型的冠状病毒特征,而且未发现有其它病毒粒子的存在。病毒干扰试验可见其能明显干扰NDV在鸡胚中的增殖。未经任何处理的10株分离株病毒对10mL/L的鸡红细胞无血凝活性,而经Ⅰ型磷脂酶C处理后10株分离株病毒对鸡红细胞具有血凝活性。从10株分离病毒的SPF鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,经RT-PCR扩增后将产物电泳,均获得了1600bp左右的核酸片段,与当初设计引物所要扩增的IBV基因片段大小一致,所以可以断定本研究所分离的病毒为鸡传染性支气管炎病毒。回归动物后,均表现为肾肿胀、有尿酸盐沉积,形成“花斑肾”,因而确认从山东省分离到的这10株病毒为肾型IBV。应用RT-PCR方法对从山东省分离鉴定到2006—2007年间的10株肾型IBV核蛋白基因序列进行了克隆、测定及分析,结果表明,这些毒株核蛋白基因的核苷酸序列由1230 bp组成,编码由409个氨基酸残基组成的多肽,与Beaudette株相应区域基因序列长度一致。10株肾型IBV分离毒株之间相比,N基因核苷酸及推导氨基酸的同源性分别为84.6%～99.7%和86.6%～99.8%,与参考毒株N基因核苷酸及推导氨基酸的同源性分别为84.1%～98.9%和86.1%～98.5%。进行序列比较后发现,山东省大部分肾型IBV分离株的核蛋白基因的核苷酸序列存在广泛的基因突变现象,这可能是造成山东省肾型IBV分离株基因组发生变异的主要原因之一。根据本研究从山东省分离鉴定到2006—2007年间的10株肾型IBV病毒与我国其他IBV分离株、我国常用疫苗株以及国外参考毒株绘制的系统进化树发现,从山东省分离到10株肾型IBV具有两个大的基因进化群。SD0605和SD0608属于基因I型,其中主要是Mass血清型毒株,包括美国、荷兰、澳大利亚、日本等国家的IBV代表性毒株以及国内的肾型IBV代表毒株。SD0605 N基因与中国广东IBV肾型疫苗株D41以及H120同源性最高,核苷酸及推导氨基酸同源性均分别为98.9%和98.5%;SD0608 N基因与中国广西肾型毒株GX2的同源性最高,核苷酸及推导氨基酸同源性分别为94.9%和95.6%。这提示SD0605和SD0608的存在可能与山东省长期使用弱毒疫苗有关,存在基因重组现象。其余的八株分离株病毒属于基因Ⅱ型,其中主要是广东肾型IBV毒株GDS14和新疆肾型IBV毒株LX4,以及山东的IBV分离株QXIBV,与我国常用弱毒疫苗株如H120、H52等关系较远。以上结果说明山东省肾型IBV毒株与我国其他地方的肾型IBV毒株关系比较近,现有的疫苗可以对部分毒株起到一定的预防作用,但对于SD0702这种变异如此大的毒株可能很难有效预防,有必要继续跟踪研究山东省的肾型IBV流行情况,并在此基础上进行新型疫苗的研制和制定有效的肾型IBV防控措施。