天然马齿苋多糖的制备及其抗糖尿病机理的研究

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目前全世界糖尿病患者已经超过2亿,预计到2030年超过3.66亿人。尽管目前临床上有大量的西药能在短期内有效地控制高血糖,但因其毒副作用大,且不能防止糖尿病慢性并发症的发生及发展。因此,具有毒副作用小、疗效稳定等特点的天然抗糖尿病药物已引起人们的高度关注。马齿苋(Portulaca oleracea L.)多糖是传统的中草药马齿苋的主要活性成分之一,具有抗菌消炎、抑脂、抗氧化和抗糖尿病等生物活性。目前,国内外学者关于马齿苋多糖降血糖作用的研究大多停留在马齿苋粗提取液或不同部位对糖尿病动物模型阶段,研究不够系统和深入。为此,本研究从天然马齿苋多糖的分离纯化、结构特征、生物活性稳定性和抗糖尿病作用机理等方面进行了研究。采用水提法提取马齿苋多糖,并用响应曲面法对其提取工艺进行优化,得到最佳工艺条件:提取温度100℃,提取时间1.5h,水料比为20:1,提取次数3次,多糖的提取率达24.25%。用大孔树脂AB-8和响应曲面法对马齿苋多糖脱色工艺进行优化,得到最佳工艺条件:AB-8树脂用量60g/L,脱色时间为3.5h,脱色温度为50-C,马齿苋多糖的脱色率为74.25%。利用高效液相色谱法、红外色谱法和气相色谱法等仪器法,结合水解法、高碘酸氧化法和Smith降解法等化学方法初步研究了POP Ⅰ、POP Ⅱ和POP Ⅲ的一级化学结构。POP Ⅰ的分子量为9.36kD,由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其组成摩尔比为1:1.073:1.29:1.89:2.39:3.38。主要通过1→2和1→6糖苷键连接,并含有硫酸根。POP Ⅱ的分子量为9.25kD,由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其组成摩尔比为1:1.42:1.73:1.44:1.58:1.59,主要由1→3糖苷键键接而成,同时存在1→2、1→4和1→6糖苷键键接方式。POP Ⅲ的分子量为8.03kD,由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖组成,其组成比例为1:1.16:1.39:2.23:3.19。主要由1→2和1→6键型键接而成,并含有硫酸根。采用比色法研究了马齿苋多糖体外抗氧化活性。马齿苋多糖具有清除羟基自由基和DPPH、抑制Fe2+诱发的脂质过氧化的作用。其抗氧化能力依次为:POP I>POPⅡ和POPⅢ。以胰岛β细胞(HIT-T15cells)为研究对象,建立alloxan诱导氧化损伤胰岛p细胞模型,通过测定细胞增殖能力,胰岛素分泌水平、SOD活性、细胞内ATP含量、细胞内游离Ca2+水平及线粒体膜电位变化等指标,探讨马齿苋多糖抗糖尿病的机理。结果显示,马齿苋多糖能够促进胰岛细胞的增殖、增加细胞内ATP含量、促进胰岛素的分泌、提高SOD活性,并可以抑制四氧嘧啶诱导的细胞内Ca2+水平升高和线粒体膜电位的下降。由此推理,马齿苋多糖抗糖尿病的作用机理与其清除氧自由基,抗氧化活性和修复胰岛p细胞损伤有关。研究了保存时间和保存温度对马齿苋多糖清除羟自由基能力影响。结果表明随着保存时间的延长和温度升高,马齿苋多糖抗氧化能力下降。本研究从马齿苋多糖的提取、分离、纯化、结构解析、抗氧化和抗糖尿病作用机理等方面进行了较为系统地研究,为进一步深入开展马齿苋作为天然抗糖尿病药物或功能性食品的研究提供了科学的理论依据。
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