人牙乳头间充质细胞的分离培养及生长分化的实验研究

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牙髓-牙本质复合体构成牙齿的主体,是组织工程化牙齿构建的关键。因此,牙髓-牙本质复合体的建立将是今后组织工程牙研究的重点。本研究根据组织工程学的理论和方法,对构建组织工程化牙髓-牙本质复合体的种子细胞、支架材料等问题进行了系统性地研究,以期为牙髓-牙本质复合体的构建提供理论基础和实验技术路线。 本试验的目的为:1、体外分离培养人牙乳头间充质细胞(Human dental papilla mesenchymal cells,hDPMCs),研究其细胞生物学性状,为下一步的研究提供细胞来源。2、探讨生长因子bFGF和IGF-Ⅰ对体外培养的hDPMCs增殖和分化的影响。3、探讨hDPMCs向成牙本质细胞的定向分化机制。4、制备新型组织工程牙生物可降解支架材料,探讨hDPMCs与可降解泡末支架材料复合生长情况,为构建组织工程化牙髓-牙本质复合体提供理论基础和实验方法。 本试验的方法为:1、选择3~4月胎龄的自然流产人胚胎,解剖牙乳头,组织块法培养hDPMCs,用波形丝蛋白和细胞角蛋白双重染色鉴定细胞;倒置显微镜下观察细胞的体外生长特点;通过Ⅰ型胶原、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白免疫细胞化学染色,对细胞体外培养条件下的基质形成能力进行研究;通过茜素红染色对细胞的矿化能力进行研究。2、采用四唑蓝比色法观察IGF-Ⅰ
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