骨性关节炎(OA)是一种严重影响老年人的身心健康和生活质量的最常见的慢性退行性疾病。其发病率随年龄增加而升高,随着我国逐渐步入老龄化社会,预期发病率将呈逐年增高的趋势。依据OA的发病部位、受累关节多少和发病特点,膝关节OA最常见,早期主要症状为膝关节疼痛、酸软。晚期可出现关节运动受限、肌萎缩、膝内外翻等畸形。故,探索骨关节炎的发病原因和发病机制,已成为各国预防和治疗骨关节炎的研究的重要课题和热点。肾素-血管紧张素系统(RAS)是人体内的一种重要体液调节系统。近年来,RAS被证实在骨代谢中发挥着重要的作用,RAS的各标志因子在骨组织的成骨细胞、破骨细胞、软骨细胞及骨连接组织中均有表达,且参与骨骼的生长发育和代谢调控。RAS主要包括肾素、血管紧张素原(AGT)、血管紧张素转换酶(ACE)以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)等。阿利吉仑是一种口服的新型RAS抑制剂,能有效抑制血管紧张素原向血管紧张素I的转化,减少AngⅠ、AngⅡ的形成。一些研究表明说明阿利吉仑的干预可能会减轻骨关节炎症状,本文主要探索阿利吉仑对膝骨关节炎的治疗作用及作用机制。第一部分 阿利吉仑对膝骨关节炎大鼠受损区域软骨组织病理学的影响目的:探索阿利吉仑对膝骨关节炎大鼠软骨细胞的形态和排列的影响以及软骨组织的保护作用。方法:采用改良后的Hulth法构建OA动物模型,将实验大鼠随机分为3组:假手术组、膝骨关节炎组、阿利吉仑干预组。建模成功后,测定并比较3组大鼠的体重,Masson染色分析对比三组大鼠软骨细胞的形态和排列,番红花染色对比3组大鼠组织切片以探索软骨结构的完整性,使用Mankin评分对关节软骨基质着色程度、软骨结构和软骨细胞数量的量化评分,来分析软骨的损伤程度。结果:3组大鼠间的体重无显著差异。Masson染色显示与假手术组相比,膝骨关节炎组大鼠的软骨细胞肥大,软骨细胞肥大区宽度显著增加,排列出现紊乱,细胞扩散区宽度显著降低,阿利吉仑的干预能够改善这些症状。番红花染色结果显示假手术组大鼠组织切片中的软骨细胞着色均匀,软骨结构和潮线清晰,膝骨关节炎组染色面积明显减少,阿利吉仑的干预能增加染色面积。Mankin评分结果显示阿利吉仑组的番红花染色评分、结构评分以及软骨细胞评分介于假手术组与膝骨关节炎组之间。结论:阿利吉仑能够有效抑制膝骨关节炎大鼠软骨组织的破坏。第二部分 阿利吉仑对大鼠膝骨关节炎损伤标志物的影响目的:探索阿利吉仑的干预对膝骨关节炎大鼠血清中炎性因子的影响方法:采用酶联免疫吸附(ELISA)测定3组大鼠血清中的IL-1、IL-6浓度。使用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测Runx2和TNF-α在3组大鼠软骨组织中的mRNA表达,同时采用蛋白质印迹法(Western blot,WB)对3组大鼠软骨组织中的Runx2和TNF-α蛋白表达水平进行检测,对检测结果进行对比、分析。结果:膝骨关节炎组大鼠的血清中IL-1和IL-6浓度与假手术组大鼠相比显著增加,阿利吉仑干预组大鼠血清中的浓度与膝骨关节炎组相比,显著降低。qRT-PCR和WB结果显示Runx2在膝骨关节炎组大鼠软骨组织中的的mRNA及蛋白表达水平,与假手术组大鼠相比显著升高,而阿利吉仑干预组,表达值显著降低。qRT-PCR和WB结果显示TNF-α在膝骨关节炎组大鼠软骨组织中的的mRNA及蛋白表达水平,与假手术组大鼠相比显著升高,而阿利吉仑干预组,表达值显著降低。结论:阿利吉仑能显著降低膝骨关节炎大鼠中的炎性因子水平第三 部分阿利吉仑对大鼠膝骨关节炎保护作用的机制研究目的:探索阿利吉仑保护膝骨关节炎大鼠的软骨组织的分子机制。方法:采用酶联免疫吸附(ELISA)测定3组大鼠血清中的肾素浓度。实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)、蛋白质印迹法(WB)和免疫组化法测定肾素在3组大鼠软骨组织中的表达,qRT-PCR测定AngII、ACE、AT1R和AT2R在3组大鼠软骨组织中的mRNA表达,WB测定AngII、ACE、AT1R和AT2R在3组大鼠软骨组织中的蛋白表达。结果:骨关节炎组大鼠血清中肾素浓度及在软骨组织中肾素的表达,与假手术组大鼠相比显著增加,而在阿利吉仑干预组,浓度及表达值显著降低。qRT-PCR和WB结果显示AngII、ACE、AT1R在膝骨关节炎组大鼠软骨组织中的mRNA表达,与假手术组大鼠相比显著增加,阿利吉仑干预组,表达值显著降低;AT2R在膝骨关节炎组大鼠软骨组织中的mRNA表达,与假手术组大鼠相比显著下降,阿利吉仑干预组,表达值显著增加。结论:阿利吉仑能够通过抑制早期RAS,进而起到保护膝骨关节炎大鼠软骨的作用。