化浊解毒方法对肝纤维化大鼠血清中TGF-β1及肝组织中CTGF的作用研究

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目的:观察化浊解毒方对肝纤维化大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)水平的影响;探讨化浊解毒方对实验大鼠肝纤维化的防治作用及其机理,为化浊解毒方在临床的广泛应用提供理论依据。   方法:建立DMN肝纤维化大鼠模型,清洁级SD大鼠70只,雄性,体重(200±20g)随机分为正常对照组(n=10),模型对照组(n=20),鳖甲软肝片组(n=10),化浊解毒方低、中、高剂量组,每组10只。适应性喂养1周后,除正常对照组外均给予1%DMN10mg/kg体重腹腔内注射,共13次,实验第1周连续用药3日,1次/日;第2-6周每周连续用药2日,1次/日,每周固定开始给药时间为周一上午9:00。至第4周末,大鼠中度肝纤维化模型建成。给药:从第4周开始至8周末,正常组、模型对照组,给予生理盐水10ml/kg灌胃,日1次,;化浊解毒方低、中、高剂量组分别给予含药量为1.35g/ml、2.7g/ml、5.4g/ml的生药水煎剂灌胃,灌胃液体量为10ml/kg,1次/d。鳖甲软肝片组,临用时研末以蒸馏水配成混悬液,用药量为0.154mg/kg,1次/d。于8周结束时,从腹主动脉取血,分离出血清。迅速解剖出肝脏,观察肝脏的颜色、质地,沿肝脏长轴切取约2mm厚的肝组织放入10%中性福尔马林中固定,常规制备肝组织切片,切片厚度约4μm。部分肝组织用生理盐水漂洗数次后,滤纸吸干,称取0.5g,常规制备肝组织匀浆。然后3000r/min4℃离心,取上清液,-20℃冰箱保存备用,用前恢复至室温。   采用免疫吸附法检测大鼠血清中TGFβ1、肝组织匀浆中CTGF的水平。数据用均数±标准差((x)±s)表示,运用SPSS13.0统计软件处理。两个样本均数比较采用t检验,多个样本均数比较行完全随机设计单因素方差分析。   结果:   1、一般情况   正常对照组大鼠进食良好,皮毛顺滑有光泽,精神状态良好,喜动,体重逐步增长。模型对照组大鼠进食不佳、精神不振、皮毛干枯黯淡、小便色黄,体重较前稍有增加,但较正常组轻。各治疗组大鼠进食尚好、精神亦可、活动状态尚可,体重逐渐增加,与正常组差别不显著。   2、化浊解毒方对肝纤维化大鼠肝脏病理形态学的影响   正常组大鼠肝脏质地软,边缘锐圆,表面光滑,新鲜,颜色略深红,未发现斑点、突起。模型组大鼠肝脏肿大明显,质硬,呈暗红色,表面粗糙,边缘较钝。各治疗组大鼠肝脏肿大不甚明显,质地较脆,略呈暗红色,表面较光滑,偶有细沙粒状增生。光镜下,正常组大鼠肝小叶排列规整,纤维组织含量极少。模型组大鼠肝细胞变性、坏死,纤维组织大量增生,肝小叶结构破坏。各治疗组与模型组比较,肝脏损伤程度均较轻,但各治疗组之间无明显病理形态学差别。   3、化浊解毒方对肝纤维化大鼠血清中TGF-β水平的影响   模型组与正常组比较差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,各治疗组除高剂量组外差异均有统计学意义(P<0.05),其中化浊解毒方中剂量组有显著差异(P<0.01)。   4、化浊解毒方对肝纤维化大鼠肝组织中CTGF水平的影响   模型组与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,各治疗组差异均有统计学意义(P<0.05),化浊解毒方中剂量组差异显著(P<0.01);   结论:   1、化浊解毒方可以降低大鼠肝组织的炎症、纤维化程度发展,改善其一般状况,表现出良好的保肝护肝,防纤维化作用。   2、化浊解毒方能显著降低大鼠血清中的TGFβ1及肝组织CTGF水平的作用可能是化浊解毒方的抗纤维化作用机理之一,通过减少TGF-β1、CTGF的含量,使HSC的激活受到抑制,从而细胞外基质的合成减少,ECM降解增多,防止其过度堆积而发挥其抗肝纤维化生物学作用。
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