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目的:通过反义核酸技术封闭胃癌细胞株SGC-7901中Survivin的表达,从而抑制胃癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,为反义核酸技术应用于胃癌的基因治疗提供一定的实验依据。
方法:靶向Survivin基因的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)作用于细胞株SGC-7901。在倒置显微镜和电镜下观察细胞形态学变化、采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性、半定量RT-PCR检测Survivin基因mRNA的表达、免疫组化检测Survivin蛋白的变化情况;流式细胞术检测SGC-7901细胞的周期变化情况、激光共聚焦检测Survivin蛋白表达情况。
结果:SGC-7901细胞经SurvivinASODN诱导后细胞出现了典型的凋亡形态学改变:细胞膜起泡,染色质凝集,核碎裂及凋亡小体的形成;实验处理细胞48小时后,SurvivinASODN2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L组对SGC-7901细胞增殖具有明显的抑制作用,抑制率分别为16.8±0.85%、39.1±1.17%、48.9±2.23%、69.2±0.76%,且呈剂量依赖性;RT-PCR结果经琼脂糖凝胶电泳显示:SGC-7901经8μmol/LSurvivinASODN作用48小时后,SurvivinmRNA的表达减少;进一步通过免疫组化实验检测发现,Survivin蛋白表达明显降低;FCM分析示经8μmol/LASODN作用48h后,亚G1期细胞比例增高,而S期细胞比例减少,细胞大部分滞留于亚G1期。激光共聚焦显示ASODN处理后,大多数细胞免疫荧光染色的平均荧光强度降低。
结论:Survivin反义寡脱氧核苷酸显著抑制胃癌细胞SGC-7901Survivin的表达,抑制胃癌细胞的增殖,并促使其凋亡。本实验为反义核酸技术应用于胃癌的基因治疗提供了一定的实验依据。