药渣中残留泰乐菌素的微生物降解途径及其降解产物研究

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泰乐菌素属大环内酯类抗生素,被广泛用于兽药或饲料添加剂,极大地促进了畜牧业的发展。然而也衍生出一些消极的后果,其中最为受人关注的是动物病原菌抗药性的增加,给人畜健康及生态环境带来风险。目前国内外对于泰乐菌素的研究大多集中在蜂蜜、牛奶、水产品、动物组织中泰乐菌素的含量分析,对于环境中特别是药渣中泰乐菌素的残留分析研究很少;有关泰乐菌素的微生物降解及其降解机制等研究还未见报道。本论文以泰乐菌素药渣为研究对象,获得的主要结果如下(1)建立了药渣中残留泰乐菌素的固相萃取-高效液相色谱测定方法。药渣中残留泰乐菌素经甲醇提取,正己烷脱脂,C18固相萃取柱净化,然后用Agilent HC-C18反相色谱柱,紫外检测器,外标法定量检测。流动相为乙腈-0.020mol·L-1磷酸二氢钾溶液,等度洗脱,流速1mL·min-1结果表明,泰乐菌素含量在0.1~100mg·L-1的范围内呈良好线性关系,在16,20,24mg·L-1添加水平下的回收率为92.9%~107.1%,相对标准偏差2.4%~4.1%,检出限为0.05mg·L-1。本法简便、快速、准确,适用于药渣、饲料等样品中泰乐菌素残留量的测定。(2)用B. vietnamiensis处理药渣5d,对初始浓度为83.33mg·L-1泰乐菌素的降解率为97.70%。与驯化前菌株降解酶1h时降解率仅为53.46%相比,驯化后的菌株降解酶对泰乐菌素有明显的降解作用,1h时泰乐菌素即可降解完全。利用紫外分光光度计对泰乐菌素微生物降解产物进行分析研究,初步研究表明泰乐菌素降解后有新的物质生成。(3)用薄层色谱法分离泰乐菌素降解产物,以甲醇/乙酸乙酯为展开剂,当调至1:6(V/V)时,可初步将产物分离为两种,降解产物展开后在紫外灯下显色,说明泰乐菌素分子结构中的共轭体系依然存在。(4)利用制备液相色谱仪和质谱仪对泰乐菌素的微生物降解产物进行分析研究,初步探讨了B. vietnamiensis降解泰乐菌素的微生物途径,其可能降解途径为:泰乐菌素A首先脱掉碳霉糖生成泰乐菌素B,然后分子中内酯键和醛基再经水解和还原生成两个新的降解产物。
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