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本论文采用生物活性追踪法筛选100种原料,比较其美白活性,其中昆仑雪菊的抗氧化活性以及抑制酪氨酸酶活性最好,确定为研究对象。利用溶剂提取法提取其中具有美白活性的物质,通过大孔吸附树脂柱层析对原料的粗提物进行分离,追踪其活性组分,再利用反相硅胶C18柱层析以及Sephadex LH-20柱层析的对活性组分进行分离纯化,最终得到活性单体化合物,鉴定其结构,并比较了3个单体化合物对DPPH·自由基的清除能力和对酪氨酸酶活性的抑制能力,评价其美白功效,为昆仑雪菊中黄酮类化合物的科学利用提供理论基础和实验依据。实验结果如下:(1)美白活性原料的筛选。根据“药食同源”理论选取原料,检测粗提物清除DPPH·自由基的能力来比较抗氧化活性,确定出20种活性较好的原料。进一步检测其对酪氨酸酶活性的抑制能力,综合美白活性,确定原料。根据实验结果得出:粗提物浓度为0.5mg/mL时,对DPPH·勺清除率为(87.43±0.23)%;浓度为5mg/mL时,对酪氨酸酶的抑制率为(91.07±3.85)%,与其他原料相比,昆仑雪菊的活性最优,因此选择其作为本研究的开发对象。(2)昆仑雪菊中美白活性物质的分离纯化。通过大孔吸附树脂柱层析对昆仑雪菊粗提物进行分离,比较不同洗脱组分的活性大小,再利用反相硅胶C18柱层析对活性最高的组分继续进行分离,得到单体化合物,最后采用Sephadex LH-20纯化单体化合物。实验结果表明:60%乙醇洗脱组分的活性优于其他洗脱组分,因此,对60%乙醇洗脱组分进行分离纯化,得到3个单体化合物,高效液相色谱检测其纯度均大于95%。(3)活性单体化合物的分子结构鉴定。运用质谱和核磁技术对3个活性单体化合物进行结构鉴定,根据碳信号和质子信号的化学位移确定了3个单体化合物为黄酮类化合物。通过分子式以及碳信号推断单体化合物K1为含4个羟基的二氢黄酮类化合物,结合质子信号对比得到K1为3’,4’,7,8-四羟基二氢黄酮;通过分子式以及碳信号推断单体化合物K2为含3个羟基的二氢黄酮类化合物,结合质子信号对比得到K2为3’,5’,7-三羟基二氢黄酮;通过分子式、碳信号以及耦合常数推断化合物K3为含5个羟基的黄酮类化合物,结合质子信号对比得到K3为奥卡宁。(4)评价活性单体化合物的美白功效。比较了3个单体化合物体外抗氧化活性和抑制酸酶活性的能力,抗氧化活性实验结果表明:K3>VC>K1>K2>芦丁;抑制酪氨酸酶活性实验结果表明:K3>熊果苷>K2>K1,综上可以看出,K3的美白活性优于阳性对照以及其他两个活性单体化合物。(5)昆仑雪菊中黄酮类化合物的提取工艺优化。通过正交试验确定了昆仑雪菊中黄酮类化合物优化后的提取工艺为:采用70%乙醇、20倍的溶剂体积浸泡昆仑雪菊,在温度为80℃下提取1h,一共提取2次,此条件下总黄酮含量为10.10%。