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背景辐射性小肠损伤多发生于腹腔、盆腔恶性肿瘤放射治疗后,临床表现为腹痛、腹泻、血便、营养不良,严重可出现脓毒血症、感染性休克等危及生命的并发症,严重影响肿瘤患者的生存质量。然而,对于辐射性小肠损伤,目前仍无理想的治疗方法。间充质干细胞具有强大的自身分化及旁分泌能力,广泛用于组织损伤修复。间充质干细胞培养基(conditioned medium from mesenchymal stem cells,MSC-CM)富含间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)旁分泌的生物活性因子,且无干细胞移植的风险,是干细胞移植的理想替代方案。课题组前期研究表明炎症预激活的间充质干细胞条件培养基能促进辐射损伤小肠组织学结构和功能的修复,改善急性辐射损伤大鼠生存状态,但其潜在的细胞机制未进一步探讨。目的明确不同状态MSC-CM对小肠上皮细胞(IEC-6)增殖、凋亡的影响及探讨相关旁分泌机制,为优化MSC-CM的临床应用提供理论基础和实验室依据。方法1.小肠隐窝IEC-6细胞分为对照组、辐射损伤组、辐射损伤+MSC-CMIEC-6(NOR)组和辐射损伤+MSC-CMIEC-6(IR)组,后3组以10 Gy X射线一次性照射IEC-6细胞建立体外急性小肠辐射损伤模型,对照组及辐射损伤组加入DMEM-F12培养基,辐射损伤+MSC-CMIEC-6(NOR)组加入正常状态间充质干细胞条件培养基,辐射损伤+MSC-CMIEC-6(IR)组加入炎症激活状态间充质干细胞条件培养基。辐射损伤后第1,3,5,7天行各组IEC-6细胞存活数的检测,第3d收集细胞行免疫荧光PCNA染色观察增殖改变,行TUNEL凋亡染色及Western blot蛋白免疫印迹法观察凋亡改变。2.ELISA检测试剂盒检测炎症预激活MSC-CM上清液旁分泌因子的含量。结果与结论1.与辐射损伤组相比,辐射损伤+MSC-CMIEC-6(IR)组IEC-6细胞PCNA阳性细胞数明显增加(P<0.05),TUNEL 阳性细胞数下降(P<0.05),凋亡相关因子Caspases-3蛋白表达明显下降(P<0.05),而辐射损伤+MSC-CMIEC-6(NOR)组的各项指标变化无统计学意义(P>0.05),结果表明辐射炎症环境下激活的MSCs条件培养基(MSC-CMIEC-IEC-6(IR))能促进损伤小肠细胞的修复,而正常培养环境的MSCs条件培养基(MSC-CMIEC-6(NOR)未见明显的修复作用,其修复机制包括促进小肠上皮细胞增殖,抑制细胞凋亡。2.与MSC-CMIEC-6(NOR)相比,MSC-CMIEC-6(IR)中多种重要的旁分泌因子(VEGF、bFGF、IGF-1、IL-10)显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),这些因子具有增强细胞再生,抑制凋亡、促进血管生成等一系列与小肠修复相关的生物学特性,表明上述因子水平的上升可能与促进放射性小肠损伤修复有关。