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目的: 本实验通过中药重楼的主要有效成分重楼皂苷Ⅰ(PPI)体外处理人骨肉瘤143B细胞,并用人骨肉瘤143B细胞经胫骨内注射建立裸鼠移植瘤模型为研究对象进一步探讨PPI抗骨肉瘤可能的作用和机制。 方法: 1.PPI对人骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡、周期、迁移、浸润的影响 将不同浓度PPI与人骨肉瘤143B细胞共同培养,在不同的时间点收集细胞,用MTT法检测活细胞数量;在显微镜下直接观察并拍照,比较不同组间细胞增殖能力的变化及细胞形态的改变。用PI和AnnexinⅤ双染色,使用流式细胞仪进行检测分析细胞凋亡率发生的变化;用PI单染色后用流式细胞仪检测分析细胞周期发生的变化。用xCELLigence实时分析仪检测PPI对细胞迁移及浸润能力的影响。Western Blot检测Wnt/β-catenin、周期、凋亡、迁移及浸润相关蛋白的表达。 2.PPI对人骨肉瘤143B细胞裸鼠移植瘤的影响 采用人骨肉瘤143B细胞构建裸鼠胫骨内移植瘤模型,观察及检测PPI对143B细胞移植瘤裸鼠体重及肿瘤的体积、重量的影响,计算肿瘤的抑制率(IR)。 结果: 1.PPI能够有效抑制人骨肉瘤143B细胞增殖能力及细胞存活率,镜下观察培养液中漂浮细胞明显增多,并呈现时间和浓度依赖性。 2.PPI可以明显下调Bcl-2、C-Myc、Cdc-2、P-GSK-3β、N-cadherin、Vimentin蛋白表达,上调cleaved-PARP、Bax、 CyclinB1、E-cadherin蛋白表达。结果表明PPI有效诱导人骨肉瘤143B细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制细胞增殖、迁移及浸润能力。 3.PPI可抑制人骨肉瘤143B细胞胫骨内注射裸鼠移植瘤肿瘤的生长,有效抑制肿瘤的体积及重量,而所用剂量并未引起移植瘤裸鼠毒副作用。 结论: 1.PPI通过作用于Wnt/β-catenin信号通路途径,有效抑制人骨肉瘤143B细胞的增殖、迁移和浸润能力,诱导细胞发生凋亡,阻滞细胞周期。 2.PPI可显著抑制人骨肉瘤143B细胞胫骨内注射移植瘤裸鼠肿瘤的生长,而无明显毒副作用。