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目的：表达纯化结核杆菌H37Rv株重组蛋白rESAT-6，用金标免疫渗滤法(DIGFA)评价其用于结核病血清学诊断的价值。
方法：以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板，构建原核表达载体pET23b-ESAT-6，酶切鉴定和序列分析重组质粒。将构建正确的重组质粒转化E.coli表达菌株BL21(DE3)plysE，IPTG诱导目的基因表达。经SDS-PAGE电泳和Western blot确认带有六聚组氨基酸标签的融合蛋白表达后，对rESAT-6的表达条件进行优化。比较不同表达条件对rESAT-6表达量和亚细胞定位的影响，选出可使rESAT-6以可溶性形式高效表达的条件作为扩大培养条件。超声破碎菌体，收集上清液，用镍离子鳌和亲和层析柱HisTap HP进行分离纯化。透析除盐，用紫外吸收法测定纯化重组蛋白浓度，接着用LABCONCO FREEZE DRY SYSTEM/FREEZONE 4.5冻干rESAT-6。以rESAT-6纯化蛋白为包被抗原，采用DIGFA法检测94份临床确诊为肺结核病人血清(其中32份痰涂菌阳性血清,62份痰涂菌阴性血清)，以及116份非结核人群(其中26例非结核病人血清，90例健康对照血清)的抗结核抗体，评价其诊断结核病的敏感性和特异性。
结果：成功构建了重组质粒pET23b-ESAT-6，rESAT-6在大肠杆菌BL21(DE3)plysE细胞内以可溶性形式表达，表达量占菌体总蛋白的14％，分子量约为6kD。纯化后的：rESAT-6样品经SDS-PAGE光密度扫描分析表明其纯度约为97.4％，每1L培养菌可获得11mg左右的rESAT-6纯化蛋白。以rESAT-6纯化蛋白为包被抗原，用DIGFA法诊断结核病，其敏感性和特异性分别为56.4％(53/94)和95.7％(111/116)。
结论：大量制备的rESAT-6纯化蛋白用DIGFA法诊断结核病有较好的敏感性和特异性，可作为结核病血清学诊断的混合抗原之一。