生物碱(Alkaloids)是植物天然次生代谢产物中数量最多的一类含氮碱性化合物。许多生物碱由于具有特殊的药理学活性已引起人们越来越多的关注。药用植物长春花(Catharanthus roseus)中含有长春碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)等重要的抗肿瘤萜类吲哚生物碱(Terpenoid indole alkaloids, TIAs)。但这些TIAs在天然长春花植株中含量较低,化学结构复杂使其人工合成十分困难,因此,仅从天然长春花植物中提取TIAs不能满足市场需求,其价格较为昂贵。近年来,关于长春花生物碱代谢途径的研究取得了很多成果,为利用植物基因工程提高长春花中药用生物碱的含量提供了理论依据。在研究工作中,需要快速准确地测定长春花中TIAs的含量,分析上下游代谢产物含量之间的关系,分析关键基因的表达水平和代谢产物含量的关系。本研究利用RP-HPLC技术对采集到的25个长春花品种叶片中的文多灵、长春质碱和长春碱含量进行了测定,并分析了3种生物碱含量之间的关系,为长春花生物碱代谢工程提供了材料选择的依据。另外通过反转录PCR技术研究了tdc,g10h,str,dat4个长春花生物碱代谢途径中的重要基因在长春花品种间的表达差异,分析了基因表达水平与生物碱含量的关系。通过研究,取得了以下进展:1.优化改进了RP-HPLC测定长春花中生物碱含量的方法,能一次完成长春花中3种的重要生物碱(文多灵,长春质碱和长春碱)的测定。2.获得了25个长春花品种中的文多灵、长春质碱和长春碱含量的数据,分析了长春碱含量与文多灵、长春质碱含量的关系。结果表明,文多灵含量与长春碱含量的相关性比长春质碱含量与长春碱含量的相关性更好。3.通过RT-PCR检测了长春花生物碱代谢途径中4个关键基因的表达水平,分析比较了基因表达与TIAs含量之间的关系。得出了香叶醇10-脱羧酶基因g10h,异胡豆苷合成酶基因str的表达水平能较好地反映下游生物碱的积累水平的结论。