周围神经瘢痕细胞的培养、增殖特征和对anti-TGF-β的刺激反应

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lujun3
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目的:探讨从一月龄大鼠坐骨神经形成的瘢痕分离、培养、纯化获得大量瘢痕细胞(成纤维细胞)的有效手段,观察体外培养成纤维细胞的增殖特征及其对转化生长因子β抗体(anti-TGF-β)的刺激反应。方法:取一月龄Wistar大鼠,双侧坐骨神经切断,在显微镜下行神经外膜显微缝合术,饲养12-15天,取出坐骨神经,选用切断处组织,运用组织块法,经过相应的纯化手段,获得纯化的成纤维细胞,波形蛋白免疫组化法鉴定,观察其生长并绘制生长曲线,按照细胞倍增时间公式计算其倍增时间,运用MTT法测定成纤维细胞对不同浓度的anti-TGF-β的反应,并运用酶联免疫吸附实验对成纤维细胞产生的Ⅰ型胶原进行测定。结果:运用组织块培养方法能够获得大量的成纤维细胞,纯度为98%以上,经Vimentin蛋白免疫组化鉴定,为成纤维细胞;绘制其生长曲线,并计算得出体外培养的第三、四代成纤维细胞体外倍增时间为3天;与不含anti-TGF-β的对照组相比,anti-TGF-β浓度分别为10ng/ml和100ng/ml的两组成纤维细胞生长明显受到抑制,与对照组之间差别有统计学意义(P<0.05),用ELISA方法对用不同浓度anti-TGF-β干预后的细胞上清进行检测,10ng/ml和100ng/ml两组成纤维细胞Ⅰ型胶原的产生明显受到抑制,与对照组相比有统计学意义。(P<0.05)结论:本研究使用的培养方法能够获得高纯度的周围神经来源的成纤维细胞,适当浓度的anti-TGF-β可以抑制成纤维细胞的生长和Ⅰ型胶原的分泌,从细胞水平证明anti-TGF-β对神经瘢痕的抑制作用。
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