水稻组织特异表达启动子的克隆及功能分析

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kkkdddz
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利用基因工程技术可以有效改良农作物性状进而增加农作物产量。启动子作为一种重要的基因表达调控元件,被广泛的应用于植物基因工程中。其中组织器官特异型启动子可以调控外源基因在植物体内所需要的组织或器官表达,在增强转基因效果的同时可以减少异源蛋白对植物发育带来的副作用,但是目前来源于作物本身的组织器官特异型启动子仍处于一个较缺乏的状况,因此对这类启动子的克隆有着良好的应用价值。水稻作为重要的粮食作物,利用组织器官特异型启动子对其特定性状进行改良具有很大的经济效益。鉴于以上情况,本研究的目的即是从水稻基因组中分离克隆出新的组织器官特异型启动子,为培育转基因水稻提供有用的工具。本研究取得的结果主要有以下几点:1.以本实验室水稻全生育期基因表达谱芯片数据为基础,经过RT-PCR验证后挑选出3个绿色组织特异表达的基因、1个根特异表达的基因和1个胚乳特异表达的基因,利用PCR法分离克隆出这5个基因上游的启动子,分别命名为PYY2、PYY4、 PYY7、PYY6和DXCP35。2.将这5个启动子分别连接报告基因GUS后转化至水稻中,对转基因苗的各个组织进行GUS染色,验证启动子的表达谱。经验证后发现,PYY2、PYY4、PYY7均为绿色组织特异表达启动子;DXCP35为一个胚乳特异表达启动子;PYY6不符合预测的结果,在各个组织均不表达。3.对DXCP35进行5’端缺失分析,共构建了6个缺失载体,通过对缺失载体的转化苗进行验证后发现,DXCP35-308与DXCP35-112之间的区域直接决定着该启动子的活性。4.对PYY2进行5’端缺失分析,共构建了7个缺失载体,通过对缺失载体的转化苗进行验证后发现,592bp长度的启动子就能维持叶片和叶鞘特异表达模式,且活性最高。
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