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本文利用温敏型小鼠乳腺癌细胞tsFT210细胞模型，以细胞周期抑制和细胞凋亡诱导活性为筛选指标，对采自云南、四川、新疆、辽宁等地区的197种中草药(247个样品)进行抗癌活性筛选，结果表明有活性的植物27种，阳性有效率为14％。 在筛选过程中，我们发现采自四川的蔓荆子果实醇提物表现出良好的抗癌活性。该提取物对tsFT210细胞具有典型的细胞周期抑制作用和细胞凋亡诱导作用。蔓荆子(Vitex trifolia L.)系马鞭草科(Verbenaceae)牡荆属(Vitex)植物，2000版中国药典记载，其果实作为中药治疗风热感冒头疼，齿龈肿痛，目赤多泪，头晕目眩等，而且在四川等我国部分地区将其用于治疗癌症。有关该植物的化学成分研究报道较多，其化学成分包括挥发油、黄酮、二萜、环烯醚萜等，但关于该植物的抗癌活性成分研究未见报道。 以阐明中药蔓荆子的抗癌成分和作为民间抗癌药的依据为目的，我们对其抗癌活性成分进行了化学及生物学研究。在活性成分的分离过程中，利用tsFT210细胞模型以细胞周期抑制和细胞凋亡诱导活性为抗癌指标，通过微量预试确定活性部位和活性组分，继而确定活性成分的分离方案，由此共分离得到18个化合物。根据相关理化数据和波谱数据对18个化合物的化学结构进行研究，并予以鉴定，各化合物的结构归纳如Fig.1所示。其中，化合物1-6为劳丹烷型二萜，7-13为黄酮，14为环烯醚萜，15为木脂素，16为甾体，17，18分别为酚酸和脂肪酸类化合物。化合物8，15和16系首次从本属中分离得到。 在上述化学工作的基础上，本论文首先应用MTT法测定了单体化合物对癌细胞的增殖抑制作用，继而应用流式细胞术结合细胞形态学检测的方法，用tsFT210和人慢性骨髓性白血病K562细胞，深入研究了18个单体化合物对该两种癌细胞的细胞周期抑制，细胞凋亡诱导及细胞杀伤等抗癌活性特点，并以倍量稀释法测定了抑制细胞周期和诱导细胞凋亡的最小有效浓度。劳丹烷型二萜1-6高浓度下诱导tsFT210和K562细胞凋亡，而在低浓度范围内主要将细胞周期抑制在G0／G1期。本文得到的黄酮类化合物，除10和13具有诱导细胞凋亡的活性外，均将tsFT210细胞的细胞沈阳药科大学博士论文摘要凡OCOCH3OCOCH3l:RI=0，RZ=HZ2:Rl=姚，RZ二03:Rl=H，RZ二二OCOCH」4:RI=OCOCH3，RZ二115:RI“OCOCH36:R:“OH7:Rl二RZ二9:Rl=RZ二10:Rl二RZ11:Rl二RZ12:Rl二Rs13:Rl二Rs二氏二OCH3·二OCHs，R3=Rs凡二O卜二O卜卜，5卜叮OORRR4=RR4=R=R4=l=R4=I=R5ri却二OCH3，R3二RS二R6二OH二OCH3，Rs二RS二OH，R6二H二OH，RZ二R4=H二OH，R;二H，RZ“声D习luH3CQ 、、‘承该- ”飞一厂一毛少一17CH。(CHZ)16COOHl8Structures of compounds isolated from巧textr如liaL gF沈阳药科大学博士论文摘要周期阻断在GZ/M期，且呈现良好的剂量依赖性，但对K562细胞则主要显示诱导细胞凋亡活性。木脂素及其它化合物也具有细胞周期抑制，细胞凋亡诱导和细胞毒活性。论文根据活性测试结果比较总结了18个化合物在两个癌细胞系上的作用特点和规律，并阐明了这些活性化合物是通过阻断细胞周期进程，诱导细胞凋亡或/及杀伤细胞发挥对癌细胞的增殖抑制作用。 通过上述研究发现，化合物9(vitexic抑in)具有非常强的抗癌活性，将tsFTZ10细胞的细胞周期抑制在G2/M期的最小有效浓度为0.04刀g/nll(0 .1刀M)，量效和时效研究呈现良好的剂量和时间依赖关系，与紫杉醇在该模型上的作用特点类似，但比紫杉醇的作用强。综合考虑其活性及在本植物中的含量(收率为0.3%)，本论文系统研究了vitexic哪in在人癌细胞K562上的抗癌作用的生物学特性。文中首先应用SRB法测定了其细胞增殖抑制活性，继而通过流式细胞术分析结合细胞形态学观察和DNA梯状带检测，阐明了vitexicarpin首先促使癌细胞的细胞周期阻滞在GZ从期，继而使GZ佩期细胞退出细胞周期，进入凋亡程序，从而发挥其抑制细胞增殖的作用。 综上所述，本论文首次系统研究了中药蔓荆子的抗癌活性成分，阐明二菇、黄酮、木脂素类等化合物是该植物发挥抗癌作用的物质基础，为该植物在我国用于癌症治疗的民间用法提供了科学依据。同时，本研究首次发现劳丹烷型二菇1一6，黄酮7一9，n一12，和木脂素类化合物15是新的细胞周期抑制剂，该结果为细胞周期抑制剂提供了新的结构类型即劳丹烷型二菇和双环氧木脂素。而且本论文为抗癌药的研究提供了新的先导化合物，尤其是vitexicarpin和劳丹烷型二菇，有望该类化合物本身或经结构改造开发成为癌症预防或化疗药，本论文的研究结果也为今后中药蔓荆子作为抗癌药的开发利用奠定了有益的基础。