目的：　　1.制备小鼠源性ayw亚型HBV S-鼠ecdCD40L融合基因真核表达载体并采用软件预测其所表达融合基因蛋白的合理性及其生物活性。　　2.检测ayw亚型HBV S-鼠ecdCD40L表达对乙肝转基因小鼠肝脏树突状细胞(DC)成熟分化和功能的影响，分析其清除乙肝病毒的可能机制。　　方法：　　1.首先分离培养小鼠脾脏淋巴细胞，提取淋巴细胞总RNA，从中扩增小鼠CD40L胞外段(ecd)基因，然后从PCP10质粒中扩增ayw亚型HBV S基因。通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法将这两段基因序列及连接链(linker)串联，串联后采用双酶切法与载体pcDNA3.1相连接，构建质粒pcDNA3.1-ayw亚型HBV S-鼠ecdCD40L(pcDNA3.1-S-ecdCD40L)。　　2.完成上述质粒构建后，对该载体进行单酶切及双酶切鉴定，采用琼脂糖凝胶电泳估计所得基因片段大小是否与设计一致，并对其基因序列进行测序。之后采用DNAStar软件及www.expasy.org网站提供的各种方案分别分析该载体表达融合蛋白的柔性、亲水性、抗原性、表位及二级结构，检测其表达蛋白是否合理，与预期是否一致。　　3.质粒pcDNA3.1-ayw亚型HBV S-鼠ecdCD40L构建完成之后，在乙肝转基因小鼠体内检测其疗效及对肝脏树突状细胞的影响。本研究将乙肝转基因小鼠随机分为4组，实验组肌肉注射质粒pcDNA3.1-ayw亚型HBV S-鼠ecdCD40L，对照组分别肌肉注射pcDNA3.1-ayw亚型HBV S、pcDNA3.1或PBS，每只100μg/25 g，2、4周后加强免疫一次，剂量同前。距首次免疫6周时，处死小鼠，取血并灌流肝脏，分离肝脏细胞，经密度梯度离心得到肝非实质细胞(NPC)后，采用磁珠分选法分离肝脏树突状细胞。分离出来的树突状细胞采用流式细胞仪、混合淋巴细胞试验及细胞因子检测来测定其细胞表型和功能的变化，并用荧光定量PCR法检测血清乙肝病毒DNA含量。　　结果：　　1.成功构建ayw亚型HBV S-鼠ecdCD40L真核表达载体，经琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定，酶切片段大小及基因序列与设计相符。通过软件DNAStar中的Protean程序及www.expasy.org网站提供的Protscale方案及HNN方案分析ayw亚型HBV S、鼠ecdCD40L两个基因连接之后其表达蛋白的疏水性和亲水性无改变，也没有出现新的表位。连接链区域为高柔性区，不影响两侧ayw亚型HBV S和鼠ecdCD40L基因结构。　　2.采用磁珠分离得到的CD11c+细胞显微镜及电镜下形态与树突状细胞相符，流式检测细胞纯度较高。注射pcDNA3.1-ayw亚型HBV S-鼠ecdCD40L有应答者小鼠树突状细胞表面CD86及MHCⅡ的表达，白介素-12(IL-12)的分泌及刺激淋巴细胞的能力均高于对照组小鼠，而平均血清HBV DNA含量明显低于对照组小鼠。　　结论:　　1.该ayw亚型HBV S-鼠ecdCD40L真核表达载体的设计符合预期，其表达的融合蛋白保留了HBV S和小鼠CD40L胞外段的生物学特性，为进行下一步实验研究奠定基础。　　2.pcDNA3.1-ayw亚型HBV S-鼠ecdCD40L重组表达载体介导的ayw亚型HBV S-鼠ecdCD40L表达能有效促进转基因小鼠肝脏树突状细胞成熟分化和功能提高，从而增强清除乙肝病毒的能力。