论文部分内容阅读
目的:探讨哮喘患者基线痰中IL-1β表达水平及其与治疗反应之间的关联,研究IL-1β在支气管哮喘患者上皮细胞间充质转化中的作用和机制。方法:共纳入51名有成功诱导出足量诱导痰炎症细胞且未治疗的哮喘患者和29名健康对照,收集其一般资料、肺功能检查结果、血常规结果、血清总Ig E结果、Fe NO、哮喘症状评分以及用药情况;收集受试者诱导痰、外周血标本,检测基线水平诱导痰中细胞分类、炎症因子RNA和蛋白水平。并对哮喘患者进行规范治疗并进行6个月随访,评价其维持症状所需的用药情况以及治疗后肺功能及症状评分改善情况。通过支气管镜检查收集受试者支气管粘膜组织,28例患者和4例健康对照收集到粘膜组织活检,采用IPP软件对患者网状基底膜厚度进行测量。免疫组化进行EMT相关蛋白的检测。在体外实验中,以A549细胞为实验对象,以IL-1β联合TGF-beta/IL-4刺激细胞,检测上皮细胞间充质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)细胞形态和标志物表达的变化,探索IL-1β在上皮细胞EMT中的作用,以及介导此过程信号通路的变化。结果:1)在51名哮喘患者中,以诱导痰嗜酸性粒细胞3%以及嗜中性粒细胞61%为界值,分为嗜酸性粒细胞型、嗜中性粒细胞型、寡粒细胞型和混合粒细胞型哮喘。在嗜中性粒细胞哮喘中,诱导痰IL-1βm RNA表达显著升高(p<0.05)。在基线水平,四种亚型患者肺功能没有明显差异,但嗜中性粒细胞型哮喘在治疗6个月后肺功能改善率较嗜酸性粒细胞型哮喘差(p<0.05),基线水平诱导痰IL-1βm RNA与肺功能改善率成负相关(p<0.05)。痰上清液中IL-1β的蛋白水平与所有51哮喘的肺功能改善率成负相关(p<0.05)。2)哮喘患者上皮下网状基底膜厚度较健康对照显著增厚(p<0.05)。气道上皮免疫组化提示,哮喘患者上皮细胞EMT标志物E-cadherin较正常对照下降,纤维连接蛋白Fibronectin上升。3)在体外实验中,单独的IL-1β不能促进A549细胞系发生EMT,但是IL-1β联合TGF-β1,显著加强TGF-β1诱导哮喘上皮细胞EMT。糖皮质激素和孟鲁司特钠不能逆转IL-1β联合TGF-β1诱导的哮喘上皮EMT。相关信号通路检测提示,IL-1beta联合TGF-beta能够促进ERK、P38和JNK多条信号通路的磷酸化。结论:中性粒细胞表型哮喘患者基线诱导痰IL-1β的表达与患者肺功能改善不良密切相关,体外研究提示IL-1β联合TGF-β1促进哮喘上皮细胞EMT的过程,其中可能有MAPK等多条信号通路参与。