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第一部分:大鼠30%小体积肝移植模型的建立
为建立大鼠小体积肝移植模型,将60只SD大鼠分为30%肝移植组(SLT)、全肝移植组(WLT)和70%肝切除组(PH),全肝移植组参照改良Kamada法建立原位肝移植模型,小体积肝移植组参照Man K等所采用的小体积肝移植方法,并加以改进。分别观察三组大鼠的一周生存率。结果提示:70%肝切除组一周生存率为100%;全肝移植组一周生存率为91.7%;而30%肝移植组一周生存率为50%。研究结果表明:30%的大鼠小体积肝移植模型适合本课题研究。
第二部分:苦参碱对大鼠小体积肝移植缺血再灌注损伤的保护作用
为了探讨苦参碱对大鼠小体积肝移植缺血再灌注损伤的保护作用,本实验采用大鼠30%的小体积肝移植模型,将322只雄性SD大鼠随机分为对照组、小剂量治疗组(40 mg/kg)、大剂量治疗组(80 mg/kg)和假手术组。观察移植术后一周生存率的变化,分别检测移植术后2h,4h,1d,2d,3d,7d血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH);观察移植术后肝脏病理在光镜中的改变。结果提示:①与对照组比较,治疗组术后一周存活率明显改善,而治疗组间无显著差异。②与假手术组比较,小体积肝移植各组各时间点的肝功能指标均增高;③与对照组比较,苦参碱治疗组术后各时间点肝功能指标均降低;④与低剂量治疗组比较,高剂量治疗组术后各时间点的肝功能指标也有所降低,统计学差异显著。⑤移植肝标本HE染色示:苦参碱治疗组肝小叶结构基本正常,炎性反应明显减少。研究结果表明:苦参碱对大鼠小体积肝移植缺血再灌注损伤具有保护作用。
第三部分:苦参碱防治小体积肝移植缺血再灌注损伤的机制探讨
为探讨苦参碱防治大鼠小体积肝移植缺血再灌注损伤的机制,本实验采用大鼠30%的小体积肝移植模型,将322只雄性SD大鼠随机分为对照组、小剂量治疗组、大剂量治疗组和假手术组。分别检测移植术后2h,4h,1d,2d,3d,7d肝组织IL-6,TNF-α表达水平,采用TUNEL方法检测各组大鼠移植术后4h的调亡情况,并观察术后移植肝脏病理形态在电镜下的改变。结果提示:①与对照组比较,治疗组术后肝组织IL-6,TNF-α表达水平明显减少;②与低剂量治疗组比较,高剂量治疗组术后各时间点IL-6,TNF-α值也均降低。③移植肝标本电镜下显示,苦参碱治疗组中肝细胞和肝窦内皮细胞损伤明显减轻,细胞形态明显改善。④通过对移植肝组织TUNEL检测发现,与对照组比较,苦参碱治疗组再灌注后4h凋亡的肝细胞明显减少。研究结果表明:苦参碱可以通过抑制TNF-α、IL-6等炎症性细胞因子的释放,减轻肝细胞和肝窦内皮细胞的损伤,减轻肝脏内实质细胞调亡,从而减轻移植术后的缺血再灌注损伤。