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尽管预防性乙肝病毒（hepatitis B virus,HBV）疫苗已经在全球广泛应用,但慢性持续性乙肝病毒的感染率仍居高不下,目前全世界慢性HBV感染者已经超过3.7亿人,乙肝相关的肝硬化和肝癌的死亡率也逐年增加,严重威胁着人类的健康。目前,由于尚不清楚HBV感染后慢性化的确切机制,所以无法制定出行之有效的治疗方法和方案。因此,明确HBV感染的慢性化机制,可为乙肝的临床治疗提供新的线索和可靠的理论依据。关于乙型肝炎病毒感染后的慢性化假说很多,既往的研究提示可能与T细胞的无能或耗竭,树突状细胞的数量和功能的下降及机体对病毒的免疫耐受有关。但具体何种机制在肝脏的免疫耐受中占主导地位,尚不明确。以往人们认为维持体内免疫耐受的主要机制是中枢免疫器官发生克隆清除,在外周诱导自身潜能细胞进入免疫无能状态,及部分淋巴细胞对自身抗原的免疫忽视。Treg的发现使人们对免疫调节及免疫耐受有了全新的认识,自Sakaguchi等人于1995年在未免疫小鼠外周血循环中发现了CD4+CD25+T细胞（Treg）后,大量实验证据表明,机体可能更主要的是通过Treg以“主动”的方式维持自身免疫耐受。这在对白色念珠菌,利什曼原虫感染慢性化的研究中已得到证实,从而为我们对乙肝病毒慢性持续存在的研究提供了线索。在HBV感染中,HBV病毒作为嗜肝的DNA病毒,本身对肝细胞并没有损害;而在清除胞内乙肝病毒和肝细胞的损伤中均起关键作用的是MHC-I类分子限制性的CD8+ T细胞即细胞毒性T细胞（cytotoxic T lymphocyte ,CTL）。在急性乙肝病毒感染中,可激发强烈的、多克隆的表位特异性CTL反应;而在慢性感染中,这些反应是微弱的甚至缺失的,造成CTL反应低下的原因仍有待于研究。近年来的研究表明,Treg可通过与T细胞的相互作用发挥免疫调节机制。在此基础上我们提出了假设,在慢性感染中,Treg是否就是造成表位特异性CTL免疫反应低下的元凶?基于此研究目的,我们首先系统全面的对乙肝患者外周血中的Treg进行定量检测和功能分析。研究发现其Treg的频率及CD4+CD25highFoxp3+T细胞频率均增高,并有功能性表型分子的表达,提示Treg可能在乙肝慢性感染中担负着重要的免疫调节效应。在鉴定表型的过程中,发现CD4+CD25highCD127low T细胞与CD4+CD25highFoxp3+T细胞呈显著正相关,故CD127可作为一种替代Foxp3作为Treg新的特征性表型。因CD127在细胞表面表达,易于检测,染色时不会对细胞造成损害,故可作为一种于Treg鉴定和分选的最佳表型。在同时进行的表位特异性CTL的定量检测及功能分析中发现,在乙肝慢性感染中,表位特异性CTL虽与急性乙肝病毒感染中相比频率较低,但还是可以被检测到的,只是存在一定的功能缺陷。在穿孔素,颗粒酶B的检测中发现穿孔素和颗粒酶B阳性的细胞主要分布在特异性CTL以外的细胞群,包括CD8+T细胞群和CD8?T细胞群。相反,在特异性CTL中,穿孔素或颗粒酶B阳性的细胞均处于低水平分布状态。这些实验结果提示可能有非特异性具有细胞毒性功能的细胞参与了肝脏的损伤。以上研究表明:当体内存在高病毒载量时,CTL不足以控制病毒的复制,只有通过募集非特异性旁立活化的细胞来清除病毒,但同时也造成了肝细胞的破坏。目前,这种旁观者效应所造成的肝脏损害已越来越受到研究者的重视。同样在IFN-γ的检测中亦发现,大多数CTL无IFN-γ的表达或仅仅是很微量的表达,即使在体外肽刺激扩增后,这些细胞分泌IFN-γ的能力仍相当低。这表明尽管在慢性乙肝患者外周血能检测到表位特异性的CTL,但其免疫监视作用已经丧失,呈现一种病毒持续性复制状态。值得注意的是,我们发现在慢性乙肝患者外周血中Treg频率明显增高且与表位特异性CTL的频率呈现负相关,这种现象给了我们新的提示,为此我们用磁珠分选出Treg后在体外作不同细胞亚群共孵育,从而研究Treg与表位特异性CTL的相互作用机制。结果表明Treg可抑制表位特异性CTL的增殖和IFN-γ的分泌,提示前期现象的发现并非偶然,Treg确实可以通过T-T接触和细胞因子分泌的方式下调表位特异性CTL的免疫学效应从而影响病毒的清除,这可能是造成乙肝病毒在患者体内慢性持续存在的重要原因之一。在乙肝病毒被发现的近三十年来,很多研究者一直致力于抗病毒药物的研发,但到目前为止还没有一种药物可以使乙肝患者完全治愈。模拟抗原（mimogen）的出现为乙肝治疗提供了新的策略,它是通过在对天然抗原的免疫识别研究得到的抗原的表位图谱及其精细结构-功能关系的基础上,观察了表位特异性T细胞应答与HBV感染的相关性后,提出的“通过mimogen克服免疫耐受从而进行免疫治疗”的治疗性疫苗研制新策略。其目的在于激发机体特异性主动的免疫反应,它的应用可以使乙肝患者体内的表位特异性CTL的数量和功能增强。我们追踪观察了部分应用mimogen的病例,在改善其体内表位特异性CTL的功能状态后,以期待观察Treg发生的变化。结果显示注射mimogen的患者在表位特异性CTL频率升高的同时,Treg的频率降低。这表明在体内Treg与CTL之间确实存在一种相关性,而这种相关性是因为Treg下调表位特异性CTL的免疫效应造成的。我们的研究结论为乙肝病毒慢性持续存在提供了新的理论依据,同时通过控制Treg的作用,提高表位特异性CTL的免疫效应来清除病毒可望成为乙肝治疗的新的策略。