论文部分内容阅读
目的:中华苦荬菜（Ixeris chinensis（Thunb.）Nakai）与苣荬菜（Sonchus brachyotus DC.）同属菊科植物,我国某些地区常将二者作为北败酱药材使用,实验对二者化学成分及药理作用进行了比较研究,为质量标准制定、规范临床应用及资源开发提供理论依据。方法:利用显微鉴定的方法,对中华苦荬菜与苣荬菜构造进行鉴定,观察二者异同;采用UHPLC-Q Exactive轨道肼高分辨质谱对中华苦荬菜与苣荬菜提取物进行分析,确定二者主要化学成分;采用HPLC法建立中华苦荬菜与苣荬菜指纹图谱,建立HPLC-UV法同时测定中华苦荬菜与苣荬菜中绿原酸、菊苣酸、木犀草苷、异绿原酸C含量,色谱柱为Waters C18（3.5μm,4.6×150mm）,流动相A为甲醇,B为0.5%冰醋酸水溶液,梯度洗脱（015min,10%25%A;1535min,25%35%A;35min50min,35%50%A;50min55min,50%70%A）;检测波长330nm;流速1.0m L·min-1;柱温30℃。通过建立四氯化碳致小鼠肝损伤模型比较分析中华苦荬菜与苣荬菜保肝药理作用;通过建立二甲苯致小鼠耳肿胀模型、角叉菜胶致大鼠足肿胀模型、醋酸致小鼠扭体实验、醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的实验,对比分析中华苦荬菜与苣荬菜抗炎药理作用。采用灰色关联方法,将HPLC图谱的各组分峰的峰面积和保肝药效数据相关联,研究其谱效关系。结果:显微观察结果表明中华苦荬菜与苣荬菜组织构造具有一定相似性,均有外韧型维管束,不等式气孔,主要区别有,苣荬菜叶表皮细胞垂周壁略弯曲,苣荬菜细胞内含有大量颗粒状物,维管束数量不同,中华苦荬菜维管束3束,苣荬菜3-4束。UHPLC-Q Exactive Orbitrap-HRMS检测结果:二者含有9种共同化学成分,分别为咖啡酰酒石酸,5-咖啡酰奎宁酸,菊苣酸,菊苣酸异构体,咖啡酰阿魏酰酒石酸,3,5-二咖啡酰奎宁酸,木犀草素-7-O-葡萄糖苷,4,5-二咖啡酰奎宁酸,芹菜素-7-O-葡萄糖苷。通过分析10批中华苦荬菜与苣荬菜HPLC图谱,建立了中华苦荬菜与苣荬菜指纹图谱。二者指纹图谱中中华苦荬菜与苣荬菜共有色谱峰分别对应绿原酸、菊苣酸、木犀草苷、异绿原酸C及一种暂未标定的成分。建立HPLC同时测定中华苦荬菜与苣荬菜中绿原酸、菊苣酸、木犀草苷、异绿原酸C含量的方法,绿原酸回归方程y=1672.8x–23600;菊苣酸回归方程y=2718.1x–195790;木犀草苷回归方程y=989.2x–20956;异绿原酸C回归方程y=3149.9x–34712,相关系数均在0.9990以上。方法学验证结果:精密度,重复性、稳定性及加样回收率均在规定范围内。中华苦荬菜中四种化学成分含量:绿原酸6.062 mg·g-1,菊苣酸9.291mg·g-1,木犀草苷5.950mg·g-1,异绿原酸C 0.620mg·g-1;苣荬菜中四种化学成分含量:绿原酸3.479mg·g-1,菊苣酸15.518 mg·g-1,木犀草苷2.187 mg·g-1,异绿原酸C 0.594mg·g-1。不同采收期中华苦荬菜与苣荬菜中四种化学成分含量亦不同,采收期为7月、8月的药材中四种成分含量均达到各自含量的较高水平,在进入9月后含量逐渐呈下降趋势。药理实验结果表明:中华苦荬菜与苣荬菜具有较好的保肝抗炎作用（实验组与模型组相比P?0.01）。保肝实验中,苣荬菜高剂量组(1.95g·kg-1)优于中华苦荬菜高剂量组（P?0.05）。抗炎药理实验结果:中华苦荬菜与苣荬菜提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀模型都有显著的抗炎作用（P<0.01）,苣荬菜提取物抗炎作用优于中华苦荬菜提取物（P?0.05）;角叉菜胶致大鼠足跖肿胀实验中,中华苦荬菜与苣荬菜提取物都可以有效抑制角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀,苣荬菜高剂量组抗组肿胀效果略优于中华苦荬菜,低剂量组相比较,抗足跖肿胀效果并无明显差异;冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验中,苣荬菜提取物高剂量组优于中华苦荬菜高剂量组（P?0.01）;冰醋酸致小鼠扭体反应模型中,苣荬菜高剂量组效果优于中华苦荬菜提取物高剂量组（P?0.05）。综合分析药理实验数据,结果表明中华苦荬菜与苣荬菜都具有良好的保肝、抗炎药理作用,而苣荬菜保肝、抗炎作用在一定程度上优于中华苦荬菜。利用灰色关联分析法对中华苦荬菜与苣荬菜化学成分与保肝药理作用进行灰色关联分析,研究二者谱效关系,绿原酸、菊苣酸、木犀草苷及异绿原酸C在各色谱峰关联度排序中相对靠前。结论:本实验从化学成分及药理作用两方面比较了中华苦荬菜与苣荬菜异同,分别建立HPLC指纹图谱并用于二者多种共有化学成分含量测定,通过灰色关联分析探讨了绿原酸、菊苣酸、木犀草苷、异绿原酸C对中华苦荬菜与苣荬菜保肝药理作用贡献度。为制定中华苦荬菜与苣荬菜的质量控制及新药开发提供了依据。