蚯蚓纤溶酶基因在番茄中的表达研究

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蚯蚓纤溶酶(Earthworm Fibrinolytic Enzymes,简称EFE)是一组存在于蚯蚓体内的丝氨酸蛋白水解酶,具有纤维蛋白溶解活性或纤溶酶原激活活性,既能溶解陈旧血栓又能抑制新血栓形成,可以口服,目前已广泛用于临床。本研究选择具有纤溶酶最高活性的EFE7#组分编码基因为外源目的基因,进行樱桃番茄遗传转化,对其在樱桃番茄组织中的表达进行初步的研究,为进一步探索和开发含有预防和治疗血栓疾病的基因工程食品奠定基础。本研究将本实验室已构建好的含EFE基因的番茄组成型表达载体pF和番茄成熟果实特异性表达载体pEF通过三亲交配法转入根癌农杆菌EHA105中;在建立起的高效番茄农杆菌转化体系基础上,进行目的基因转入番茄植株的研究,获得了再生植株,并对其进行了分子鉴定。结果表明,质粒转化农杆菌方法—三亲交配法效率较高。确定了适合番茄组织培养的培养基配方,确定合适的农杆菌浸染浓度是OD600值为0.3,浸染时间为10min。建立起一套高效、操作性强、适合番茄的农杆菌转化体系。提取各株再生植株DNA进行目的基因的扩增,初步鉴定共得到了22株转基因植株,酪蛋白平板检测证明目的基因转入番茄植株并有一定的蚯蚓纤溶酶活性。之后进行了半定量RT-PCR分析,由于RNA质量较差,未检出EFE转录产物。
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