基于体积放大技术的单个DNA分子检测

来源 :山东大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dreamtale07
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
第一章对单分子检测及磁球技术进行了综述。首先介绍了单分子检测的研究概况,主要包括单分子检测的主要内容、特点和采用的技术,重点介绍了单分子检测所采用的技术,涉及到光学方法、扫描探针显微方法和化学方法。其次介绍了磁球的研究现状和应用,重点介绍了磁球在DNA的分离与检测、酶的固定化、细胞分选、免疫检测等的应用。 第二章中用一种新的、简单的方法检测单个pUC19质粒DNA分子。首先取一定量的磁球(直径0.35μm)与过量捕捉探针反应,利用磁分离除去过量的捕捉探针,然后将少量目标DNA分子与远远过量的上述连接有捕捉探针的磁球在杂交缓冲溶液中充分反应,这样一个目标DNA分子通过杂交反应会结合到一个磁球上。第二步取一定量的微球(直径9.95μm)与检测探针反应,通过离心分离、清洗除去过量的检测探针。第三步将上述两步反应的产物按一定比例混合,进行杂交反应,最终通过目标DNA分子与磁球-微球的联结,形成磁球-目标DNA-微球的夹心复合体。因为在以上比例下结合了检测探针微球的浓度大大地大于结合了目标DNA磁球的浓度,所以只有一个结合了单个目标DNA分子的磁球可以结合到微球上。用磁分离除去未反应的微球,将此溶液清洗后滴加在载玻片上,用倒置显微镜以十或二十倍物镜用或者一百或二百倍物镜观察。在显微镜下看到的微球,就是一个磁球-目标DNA-微球的夹心复合体。其观测到的微球数目也就是单个目标DNA分子的数目。这个方法的最大优点是不需用复杂而昂贵的仪器,只用普通的显微镜配合常用的CCD(也可用目视)就可实现单个DNA分子的检测。 第三章同样采用了磁/微球技术的体积放大效应,通过增加反应时间和用自制振荡器改变震荡条件提高了杂交反应产率,以炭疽热的单个DNA分子为目标,研究了单分子个数与浓度的定量关系。为了准确、方便地进行单分子计数,制作了底部刻蚀有坐标方格的小池子,然后在倒置显微镜下按照坐标方格移动载物台,用CCD对每个小池子进行拍照。因为有坐标方格作为参照标准,所以拍出的照片就不会出现重复和遗漏。然后再根据拍出的照片,对微球个数进行单分子计数。对炭疽热的单个DNA分子,浓度范围在1.0×10<-19>mol/L-8.0×10<-19>mol/L间,单分子个数与浓度有正比关系。
其他文献
蒸气发生原子荧光光谱分析法由于具有较高的灵敏度和选择性而得到了广泛的应用。流动注射微柱预富集技术在原子光谱领域获得了成功的应用。本论文的主要目的是以碳纳米管等材
学位
本文主要研究了金属有机骨架材料修饰电极的制备及在电化学无酶传感器中的应用。本篇论文共分三部分,包括绪论、以碳纳米管为载体负载金属有机骨架材料及其对过氧化氢的电化学
生物可降解的聚磷酸酯由于其良好的生物相容性、链段柔软及侧链可官能化等优点已作为一种具有生物医用潜能的材料应用于药物控制释放、基因传递和组织工程等领域。目前,聚磷酸
冲刀和切刀是篆刻中主要的,也是基本的刀法。对于篆刻家而言,刀法仅仅是手段而已,并不会拘泥于刻板的法度之中,为了表达一种情感或追求某种效果,刀法的运用随时都在变化之中
本文主要介绍了两种以铜为催化中心的修饰电极的制备及其在葡萄糖无酶电化学传感器中的应用。全文共分为三个部分,包括绪论、磁负载铁酸铜-多壁碳纳米管复合物修饰电极的制备
本论文报道利用现代生物发酵技术对七种南海海洋真菌和海洋放线菌(#1962、#4275、#2557、#3920、#105F、#1403和#V4)进行了人工发酵培养,并对它们的代谢产物进行了研究。从这些真菌和
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
期刊
目前,单位主要负责人“一支笔”签字报销制度是众多机关、企业、事业单位的现实,这种现实的产生自有其因,自然也产生过积极作用。然而,现实表明:“一支笔”现象已成为当前财务管理
河蟹、河蟹,和谐、和谐,这是非常有趣的一组作品。两只乖张可爱的小河蟹既像正在对话,又像马上要掐架。左边的一只,它背甲壳的色彩黄中透白,看起来很粗糙,也许几分钟前刚在河
期刊
丁酉孟夏,与韩伟华相约在大连诚信汇艺术馆,墙上、案上是伟华新近正在创作的《有余图》系列,妙笔恣意,逸趣横生,传统笔墨与现代审美糅合一起,浑然天成,令人叹为观止。了解之