论文部分内容阅读
研究背景:肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上第五大高发的癌症,其死亡率在所有恶性肿瘤中第三位。尽管目前治疗手段在不断改进,但因为肝癌具有高复发性以及高转移性,所以肝癌患者的长期生存率并没有得到明显改善。研究HCC生长转移的可能机制才能解决上述问题,而肿瘤的炎症微环境在肿瘤的生长转移过程中起重要作用,其特征是炎性因子的异常表达、炎性细胞的过度聚集以及表型改变。已经有研究表明癌症组织内肿瘤免疫微环境浸润的Th17细胞及其标志性分泌因子白介素-17A(IL-17A)都异常升高。另有文献报道,IL-17A能够降低细胞因饥饿刺激升高的自噬水平,而自噬水平的改变往往伴随着细胞生物学特征的改变。因此,IL-17A和自噬可能在HCC细胞的发生发展过程中存在着至关重要的作用。根据上述理论,我们提出假设:IL-17A可能通过自噬途径调节肝细胞性肝癌的生长。本项目研究有助于解释临床肝癌发生发展及肝癌转移相关机制,为探索新的肿瘤治疗及肿瘤转移预防方案提供科学基础及理论依据。研究目的:本研究将主要通过体外相关实验,从IL-17A对肝癌细胞株内相关信号通路,自噬功能形态两方面明确IL-17A是如何通过自噬途径影响HCC细胞的生长或迁徙,通过分析HCC患者手术标本分析IL-17A和自噬对HCC患者肿瘤发展的关系。通过上述研究,来探讨IL-17A、自噬与HCC发展的关系。实验方法:1.通过蛋白质免疫印记技术、免疫荧光技术验证IL-17A对HCC细胞内自噬水平的影响,并利用CCK-8细胞活性实验检测细胞活性,蛋白印记技术及免疫荧光技术检测自噬相关细胞死亡水平,Transwell实验、划痕实验证实IL-17A对HCC细胞的迁徙影响,并探讨其可机制。2.通过对83例HCC患者的癌症手术标本进行IL-17A和自噬相关基因Beclin-1免疫组化染色,检测肿瘤与非肿瘤组织的差异性表达,并利用统计学软件分析IL-17A、自噬与肿瘤生长之间是否存在统计学关系。实验结果:在HCC患者手术标本中,肿瘤组织比非肿瘤组织高表达IL-17A,肿瘤内部自噬水平也相对较低。对83例HCC患者肿瘤标本进行统计学分析证实高表达的IL-17A及低表达的Beclin-1与患者肿瘤的TNM分期存在统计学意义(p<0.05)。在体外实验中,IL-17A能够降低因饥饿诱导的HCC细胞株内的自噬水平,并进一步通过该途径维持了 HCC细胞活性、减少HCC细胞的凋亡。在对IL-17A影响细胞自噬的实验中我们发现,TAB2/p38 MAPK和TAB3/p38 MAPK途径被激活,利用siRNA技术干扰相关蛋白及药物诱导等方式阻止该通路的活化可以逆转IL-17A对HCC细胞内自噬水平的影响。同时,IL-17A还能通过TAB2/p38 MAPK和TAB3/p38 MAPK途径促进了 HCC细胞的迁徙。结论:IL-17A通过激活TAB2/p38 and TAB3/p38MAPK信号通路减少自噬相关的细胞死亡,促进了 HCC细胞的迁徙。肿瘤组织内高表达的IL-17A以及低水平的自噬提示患者与患者肿瘤的TNM分期有关,且患者预后相对较差。