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目的研究蝎毒多肽提取物对肿瘤微环境中血管生成相关因子VEGF、HPA、survivin、CD34表达的影响,观察对HepG2肝癌生长的抑制作用,进一步探讨其抗血管生成的分子机制,揭示PESV的抗肿瘤作用机理,为肝癌的治疗提供理论依据,从而将PESV与传统的化疗药物相结合。方法1.MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化。2.建立HepG2肝癌皮下种植瘤模型,将荷瘤动物随机分为荷瘤对照组、PESV组和阳性对照组,阳性对照组采用顺铂作为阳性对照药物,检测肿瘤体积并计算抑瘤率,观察PESV对肿瘤生长的抑制作用。3.常规HE染色,观察肿瘤组织病理变化。4.免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、乙酰肝素酶(HPA)、survivin、CD34的表达。5.Western-blot方法检测瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、乙酰肝素酶(HPA)、survivin的表达。结果1.PESV对细胞增殖抑制率及细胞周期的影响与阴性对照组相比,PESV<20μg mL-1时,作用于HepG2肝癌细胞48h后,抑制增殖作用不明显。但当PESV>40μg mL-1时,抑制增殖作用明显增强,与阴性对照组相比,P<0.05,差异有统计学意义。20~100μg mL-1剂量组之间两两比较差异显著均,P<0.05,总体呈剂量-效应关系。流式细胞术结果显示,PESV能使细胞周期阻滞于G0/G1期,减少S期及G2/M期的细胞比例,与阴性对照组相比,P<0.05,顺铂组与PESV组相比,P<0.05,差异显著。2.PESV对HepG2肝癌生长的影响荷瘤对照组、PESV组和阳性对照组小鼠移植肿瘤的体积明显增大。分别与荷瘤对照组相比,PESV组和阳性对照组对肿瘤体积的抑制作用较明显,差异有统计学意义(P<0.05)。与荷瘤对照组相比,各给药组小鼠的肿瘤重量明显降低,差异显著。PESV组和阳性对照小鼠的瘤重分别为1.22±0.15g和0.80±0.22g。其中,阳性对照组对肿瘤的抑制作用最强,PESV对肿瘤组织也有较强的抑制作用,抑瘤率分别为63.51%和47.17%。3、PESV对肿瘤组织中VEGF、HPA、survivin、CD34表达的影响免疫组织化学染色显示,VEGF、HPA、survivin阳性产物呈棕黄色颗粒,主要定位于肿瘤细胞胞浆,CD34阳性产物表达于肿瘤组织微血管内皮细胞,经半定量图像分析,PESV组和阳性对照组肿瘤组织VEGF、HPA、survivin表达明显低于对照组(P<0.05)。4、PESV对肿瘤组织中VEGF、HPA、survivin蛋白表达的影响荷瘤对照组、PESV组和阳性对照组均可检测到VEGF、HPA、survivin蛋白的表达,与荷瘤对照组相比,PESV组和阳性对照组VEGF、HPA、survivin蛋白水平均明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1、PESV可抑制HepG2肝癌细胞的增殖和生长。2.PESV对能够干预肝癌的血管生成,并对肿瘤的侵袭转移有一定的作用。3.PESV抗肿瘤作用机制可能与降低肿瘤组织血管生成相关因子VEGF、HPA、survivin的表达及降低微血管密度有关。