激光微孔猪脱细胞真皮基质的生物相容性检测及其移植实验

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:renzha2hao
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背景:由于同种异体皮来源有限,国内外学者一直寻求用异种来源的脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)作为真皮支架来治疗深度皮肤损伤。猪来源的ADM由于来源广、价格相对较低[1]、且在制备成ADM后能够保持完整的三维立体结构而成为当前研究的热点[2],但其血管化速度慢,限制了其在临床上的广泛推广[3-6]。目的:检测激光微孔猪脱细胞真皮基质(Laser micropore porcine acellulardermal matrix,LPADM)的生物相容性及其移植后的血管化速度,探讨LPADM在临床上广泛应用的可能。方法:(1)切取成年雄性SD大鼠的背部全层皮肤,酶消化法分离出其中的成纤维细胞并培养至第三代,将其得到的成纤维细胞随机分为A、B、C三组,其中A组为与LPADM共培养组;B组为与无孔ADM共培养组;C组为单纯培养组,观察各组成纤维细胞生长、增殖的情况,并利用双夹心抗体ELISA法检测接种后第1、3、5天各组成纤维细胞活性细胞因子IL-6、IL-10、TGF-β1、VEGF、LN的分泌。(2)取成年健康雄性SD大鼠18只,在其背部正中脊柱二侧相对位置各做一2cm×2cm的“∪”形皮瓣,并将皮瓣掀起,分别移植包埋LPADM及无孔ADM,于术后1、3、10天切取标本行组织学及电镜检查。(3)健康无皮肤疾病雄性裸鼠36只,随机分为实验组和对照组,“二步法”完成手术过程,其中实验组移植LPADM和自体薄皮,对照组移植无孔ADM和自体薄皮,于术后1、3、14天各组分别取6只裸鼠处死,切取标本行HE组织学检查及电镜检查。结果:(1)共培养条件下,LPADM和无孔ADM均不会产生细胞毒性物质影响成纤维细胞的生长、增殖及活性细胞因子的分泌,实验检测到A、B、C三组的成纤维细胞均能够在15min内快速贴壁,接种后各组成纤维细胞的细胞活性因子IL-6、IL-10、TGF-β1、VEGF、LN无明显差别,差异无显著性(P>0.05)。(2)皮下包埋术后1天,LPADM的胶原中即可见类血管内皮细胞,术后3天,微孔结构中即可见新生组织长入,移植物能够与周围自体组织紧密结合,术后第10天,LPADM可见明显的血管化。而移植的无孔ADM在整个实验观察中未见新生血管形成,且炎症反应较重。(3)实验组术后1、3天的组织学切片:及扫描电镜显示,含丰富血管的基底新生组织可以通过微孔结构长入LPADM的内部,从而完成LPADM的快速血管化。实验组术后3、14天组织学切边显示:微孔结构的存在还可以为成纤维细胞向LPADM中的迁移提供一条快速通道,为LPADM胶原网架功能的重建提供基础。实验组术后14天扫描电镜显示:LPADM中迁入的成纤维细胞细胞质中粗面内质网较多,胶原分泌旺盛,正积极参与真皮的修复。对照组的ADM中未见明显的成纤维细胞迁入,且炎症反应较重,无法与机体快速紧密的结合在一起。结论:设计的这种LPADM生物相容性高;不会产生对细胞有毒性的物质,移植后免疫源性低。且微孔结构能够为LPADM的血管化提供通道,大大加快LPADM的血管化速度。从而解决了临床上异种来源ADM血管化速度慢的问题,为异种来源ADM在临床上的广泛应用提供了实验依据。
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