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目的:通过尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立脓毒症大鼠模型,探究化瘀方对脓毒症大鼠炎症因子的影响以及对脓毒症大鼠的心肌保护作用,并通过进一步检测化瘀方对脓毒症大鼠心肌TLR4信号通路蛋白及miRNA-146a的表达,探究化瘀方对脓毒症大鼠心肌保护的作用机制,为临床治疗脓毒症提供新的思路和方法。方法:实验一:取清洁级健康雄性Wistar大鼠24只,随机分为:空白组、模型组、化瘀方中药组,每组8只。空白组:大鼠预灌胃生理盐水1周,每天1次,并于第8天给予尾静脉注射生理盐水;模型组:大鼠预灌胃生理盐水1周,每天1次,并于第8天给予尾静脉注射LPS进行脓毒症造模;中药组:大鼠预灌胃化瘀方中药1周,每天1次,并于第8天给予尾静脉注射LPS进行脓毒症造模。观察并记录大鼠造模后的一般状况,造模成功6h后取材,ELISA检测各组大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1的水平,将大鼠心肌组织切片进行HE染色,显微镜下观察心肌组织病理学改变。实验二:取清洁级健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为:miRNA-146a阴性剂对照组、miRNA-146a阴性剂+中药组、miRNA-146a抑制剂组、miRNA-146a抑制剂+中药组。miRNA-146a阴性剂对照组:大鼠预灌胃生理盐水1周,每天1次,第8天给予尾静脉注射LPS进行脓毒症造模,造模前24h给予尾静脉注射miRNA-146a antagomir-nc;miRNA-146a阴性剂+中药组:大鼠预灌胃中药1周,每天1次,第8天给予尾静脉注射LPS进行脓毒症造模,造模前24h给予尾静脉注射miRNA-146a antagomir-nc;miRNA-146a抑制剂组:大鼠预灌胃生理盐水1周,每天1次,第8天给予尾静脉注射LPS进行造模,造模前24h给予尾静脉注射miRNA-146a antagomir进行miRNA-146a低表达处理;miRNA-146a抑制剂+中药组:大鼠预灌胃中药1周,每天1次,第8天给予尾静脉注射LPS进行脓毒症造模,造模前24h给予尾静脉注射miRNA-146a antagomir进行miRNA-146a低表达处理。造模成功6h后取材,RT-PCR检测各组大鼠血清miRNA-146a的表达,ELISA检测各组大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1的水平,Western Blot检测心肌组上海中医药大学硕士学位论文织TLR4、NF-κB蛋白表达,将大鼠心肌组织切片进行HE染色,显微镜下观察心肌组织病理学改变。结果:实验一结果1、动物造模后一般情况观察:与空白组大鼠相比,模型组大鼠和中药组大鼠都出现了食欲减退,饮水减少,精神萎靡,反应迟钝等的情况,但中药组大鼠的精神反应活动要优于模型组2、各组大鼠心肌组织病理学改变:脓毒症模型组大鼠心肌细胞肿胀破裂,胞核溢出破裂,心肌纤维断裂,排列不齐,可见炎性细胞侵润。中药组大鼠心肌损伤情况相比模型组大鼠减轻,心肌损伤情况得到改善,但仍有水肿和炎症细胞侵润,部分心肌细胞破裂。3、各组大鼠TNF-α、IL-1检测结果显示:与空白组相比,中药组和模型组大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1的水平明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.01);与模型组相比,中药组大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1的水平,明显降低,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。实验二结果1、动物造模后一般情况观察:四组大鼠均出现食欲减退,饮水减少,精神萎靡,毛色发黄,反应迟钝等情况,但是miRNA-146a抑制剂+中药组大鼠的情况优于miRNA-146a抑制剂大鼠,miRNA-146a阴性剂+中药组大鼠情况优于miRNA-146a阴性剂对照组大鼠。2、各组大鼠心肌组织病理学改变:各组大鼠心肌细胞都出现结构不完整,胞核破裂坏死,心肌纤维断裂,排列不齐,炎症因子侵润,组织充血水肿等的情况。miRNA-146a抑制剂组大鼠心肌损伤最为严重。miRNA-146a抑制剂+中药组大鼠心肌损伤情况相比miRNA-146a抑制剂组大鼠减轻。3、各组大鼠血清miRNA-146a、TNF-α、IL-1检测结果显示:与miRNA-146a阴性剂对照组相比,miRNA-146a抑制剂组大鼠miRNA-146a的表达降低,差异具有显著统计学意义(P<0.01),miRNA-146a阴性剂+中药组大鼠miRNA-146a的表达升高(P<0.01);与miRNA-146a抑制剂组大鼠相比,miRNA-146a抑制剂+中药组大鼠miRNA-146a的表达水平升高(P<0.01);与miRNA-146a阴性剂对照组大鼠相比,miRNA-146a抑制剂组大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1的水平升高(P<0.01),miRNA-146a阴性剂+中药组大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1的水平降低(P<0.01);与miRNA-146a抑制剂组大鼠相比,miRNA-146a抑制剂+中药组大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1的水平降低(P<0.01)。4、各组大鼠心肌组织TLR4、NF-κB蛋白检测结果显示:与miRNA-146a阴性剂对照组大鼠相比,miRNA-146a抑制剂组大鼠心肌组织TLR4、NF-κB蛋白水平升高(P<0.01),miRNA-146a阴性剂+中药组大鼠心肌组织TLR4、NF-κB蛋白水平降低(P<0.01);与miRNA-146a抑制剂组大鼠相比,miRNA-146a抑制剂+中药组大鼠心肌组织TLR4、NF-κB蛋白水平降低(P<0.01)。结论:1、化瘀方中药可以减少脓毒症大鼠炎症因子TNF-α、IL-1的释放,降低脓毒症大鼠炎症反应,并减轻脓毒症大鼠心肌的损伤。2、miRNA-146a在脓毒症中可以负反馈调控TLR4信号通路,miRNA-146a被抑制的情况下可以增加TLR4信号通路蛋白的表达,并提高炎症因子TNF-α和IL-1的水平,致使炎症反应加剧,导致脓毒症大鼠心肌损伤进一步加重。3、化瘀方中药通过上调miRNA-146a的表达进一步负反馈调节TLR4信号通路,降低信号通路上TLR4和NF-κB蛋白的表达,并减少炎症因子TNF-α和IL-1的释放,减轻脓毒症带来过度炎症反应,对脓毒症大鼠心肌具有保护作用。