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猪轮状病毒病（Porcine rotavirus disease）是由轮状病毒（Rotavirus，RV）引起的仔猪急性胃肠道传染病。其临床症状为：发烧、呕吐、恶心、腹泻、严重时可导致幼畜脱水，成年猪一般呈隐性感染。除感染猪外，还可感染人及牛、羊等动物。轮状病毒病发病日龄小、发病急以及死亡率高。没有特异性药物，只能以预防为主。在我国，猪轮状病毒分布广泛，给畜牧业造成巨大的经济损失。因此，对猪轮状病毒进行有效的防治是降低仔猪发病率，提高养猪业效益的有效手段。1992年Mason提出“转基因植物疫苗”利用分子生物学技术把外源基因导入到植物细胞中，在植物中能够大量表达外源基因的一种生物技术。VP6蛋白是轮状病毒第六个基因编码的内壳蛋白，而且也是主要的结构蛋白，约占病毒蛋白的50％。其具有较高的免疫原性和抗原性，它在检测病毒粒子的诊断方法中是最主要地靶蛋白。虽然抗VP6抗体没有中和抗体反应，可是Esquivel FR et al报道VP6蛋白能增强中和抗体应答反应。随后Feng N et al研究人员认为中和抗体反应的水平并不是总与保护关联。由VP6蛋白产生的非中和IgA单克隆抗体在活体内起到免疫作用，以抵抗轮状病毒的感染，而不是轮状病毒特异的血清IgG。依据上述思路，根据VP6基因序列和原核表达载体pET5a序列，合成了一对特异性引物RO1／RO2，分别引入限制性酶切位点NdeI和BamHI。以RO1／RO2为引物，以pGEM-T-Easy-VP6为模板，经PCR扩增得到1.194kb的VP6基因片段。以BamHI和NdeI双酶切VP6基因片段，与经同样双酶切的pET5a原核表达载体线性分子相连接，转化到E. Coli BL21（DE3）Plyss中，然后经IPTG诱导表达，结果表明已成功表达了VP6蛋白，而且获得了大小为44KD的蛋白。然后再根据VP6基因序列和植物表达载体pBI121序列，合成了一对特异性引物RO3／RO4，分别引入限制性酶切位点BamHI和SacI。以RO3／RO4为引物，以pGEM-T-Easy-VP6为模板，经PCR扩增得到1.194kb的VP6基因片段。以BamHI和SacI双酶切VP6基因片段，与经同样双酶切的pBI121植物表达载体线性分子相连接，转化到E. coli DH5a中，然后经卡那抗性筛选的阳性菌落送去测序，最后结果表明已成功的构建了植物表达载体pBI121-VP6。以冻融法将pBI121-VP6重组质粒导入根癌衣杆菌LBA4404，用叶盘法转化于NC89烟草和保定紫花苜蓿的无菌试管苗。经过愈伤诱导、分化培养基的培养，最后分化出再生苗，并经过卡那霉素（Kan）抗性筛选，获得了80株转基因NC89烟草的卡那抗性再生植株；可是没有保定紫花苜蓿转基因苗。经卡那抗性筛选的转基因烟草再生苗，提取植物总DNA和RNA，分别经过PCR、RT-PCR扩增，然后以PCR-Southern，Dot-blotting杂交检测，这些结果表明VP6基因已经成功的整合到转基因NC89烟草染色体上并正确的转录。经检测为阳性的转基因再生苗，提取植物蛋白，经Western-blotting检测，已经成功的表达了VP6蛋白而且表达的蛋白具有反应活性。