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背景:胃癌(gastric cancer)是一种具有较高发病率的恶性肿瘤,预后比较差。近年研究发现非编码小RNA(microRNA)在肿瘤的发生、发展过程中起着极其重要的作用。microRNA-34a(miR-34a)定位在人类染色体1p36,在人类肿瘤中常发生缺失,如乳腺癌、肺癌、胰腺癌和结肠癌等,但miR-34a与胃癌的关系至今未见报道,因此本研究拟探讨miR-34a在胃癌细胞中的表达及其调控机制,同时探讨miR-34a与胃癌细胞对化疗敏感性之间的关系以及作用机制,为胃癌治疗提供新方法和新的干预靶点。方法:在体外分别培养人胃癌细胞系:MGC80-3、HGC-27、NCI-N87、SGC-7901和正常人胃粘膜上皮细胞GES-1,利用实时定量PCR(quantitative real-timePCR,qRT-PCR)检测miR-34a在胃癌细胞系和正常人胃粘膜上皮细胞GES-1中的表达情况;在胃癌细胞系HGC-27细胞中转染miR-34a mimic,采用qRT-PCR方法检测HGC-27细胞中miR-34a表达变化,以验证转染效果;然后通过MTT法检测miR-34a对胃癌细胞系HGC-27细胞的活力影响;流式细胞仪分析miR-34a对HGC-27细胞增殖的影响;采用Annexin V/PI双染法分析miR-34a对HGC-27细胞凋亡的影响;采用transwell侵袭小室检测miR-34a对HGC-27细胞迁移的影响;采用Western blot方法检测miR-34a对细胞中survivin蛋白表达的影响。分别体外培养人胃癌细胞系:SGC-7901和顺铂耐药细胞株(SGC-7901/DDP),采用qRT-PCR和Western blot检测miR-34a、survivin在两种胃癌细胞中的表达情况;在胃癌细胞SGC-7901和SGC-7901/DDP中转染miR-34a mimic和miR-34a inhibitor后48h,采用qRT-PCR检测转染后细胞中miR-34a的表达变化;采用MTT检测miR-34a的异位表达对顺铂诱导的胃癌细胞细胞活力的影响;采用Annexin V/PI双染法,流式细胞仪分析miR-34a的异位表达对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡的影响;应用PI3K通路抑制剂Wortmannin进行干预,然后采用Western blot方法和流式细胞仪检测miR-34a异位表达对顺铂诱导的胃癌细胞中AKT和p-AKT表达的影响、以及对凋亡的影响。结果:qRT-PCR检测结果显示:与正常胃粘膜上皮细胞GES-1相比,miR-34a在胃癌细胞系中的表达显著下降(p<0.01);与对照组相比,在胃癌细胞HGC-27中转染miR-34a mimic后48h,细胞中miR-34a的表达显著上升(p<0.01),提示miR-34a mimic转染成功;MTT分析结果显示:在胃癌细胞HGC-27中过表达miR-34a后,细胞活力明显下降(p<0.05);流式细胞仪分析结果显示:过表达miR-34a后,细胞的增殖指数明显下降(p<0.05);细胞的凋亡显著增加(p<0.01);transwell侵袭小室检测结果显示:增强miR-34a的表达后,穿过transwell小室的细胞数显著降低(p<0.01);Western blot检测结果显示:与对照组相比,在胃癌细胞HGC-27中转染miR-34a mimic48h后,细胞中survivin蛋白的表达显著下降(p<0.01),即miR-34a与survivin蛋白的表达呈负相关。采用qRT-PCR和Western blot检测结果显示:与胃癌细胞SGC-7901相比,miR-34a在顺铂耐药细胞株(SGC-7901/DDP)中的表达明显下降(p<0.05),而survivin的表达却明显上调(p<0.05);与不经过任何处理的SGC-7901细胞相比,在SGC-7901细胞中转染miR-34a mimic48h后,细胞中miR-34a的表达显著上升(p<0.01),转染miR-34a inhibitor后,miR-34a的表达明显下降(p<0.05),提示转染效率高;MTT和流式细胞仪检测结果显示:在顺铂作用下的SGC-7901细胞中抑制miR-34a表达后,细胞活力明显上升(p<0.05),细胞凋亡数明显减少(p<0.05);而在顺铂作用下的SGC-7901细胞中过miR-34a表达后,细胞活力明显下降(p<0.05),细胞凋亡数明显增加(p<0.05),提示miR-34a与胃癌细胞顺铂化疗的敏感性有关,即过表达miR-34a有助于提高胃癌细胞对顺铂化疗的敏感性;Western blot和流式细胞仪检测结果显示:与不经过任何处理的SGC-7901细胞相比,Wortmannin可明显抑制miR-34a inhibitor和DDP诱导的p-AKT表达的升高(p<0.05);促进细胞凋亡(p<0.05)。结论:miR-34a在人胃癌细胞系中呈现出表达抑制,miR-34a可负性调节survivin蛋白的表达,并抑制胃癌细胞增殖和侵袭,促进其凋亡,增强miR-34a表达或沉默survivin基因的治疗策略有望使胃癌患者受益。miR-34a在顺铂耐药细胞株(SGC-7901/DDP)中表达下调,过表达miR-34a可增强胃癌细胞对顺铂的敏感性,其可能通过PI3K/akt/survivin信号通路发挥作用。survivin的表达受到miR-34a的调控,且均在在胃癌发生发展过程中发挥重要作用,因此有望成为胃癌靶向治疗的潜在干预靶点。