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展青霉素（patulin，PAT）是由青霉属和曲霉属等真菌所产生的一种代谢产物，广泛地存在于水果及其制品中。1943年发现之初曾因其具有一定的抑菌作用而被用作临床试验，但进一步研究发现其具有肾毒性，遗传毒性及致畸性等作用，危害公共卫生。因此建立快捷准确的免疫学检测方法非常必要，而制备抗展青霉素的特异性抗体是其中极为重要的一个环节。本研究利用化学偶联的方法成功制备了人工完全抗原PAT-HG-OVA和PAT-HS-BSA;按照严格的动物免疫程序获得了抗展青霉素多克隆抗体;根据基因工程原理构建了大容量、免疫后鼠源核糖体展示（Ribosome display，RD）单链抗体(Single-Chain Fragment Variant,scFv)文库。研究成果为展青霉素免疫学检测方法的进一步发展奠定了基础。 1.展青霉素完全抗原的合成与鉴定 展青霉素属于小分子半抗原，不具有免疫原性，因此需要将其偶联到载体蛋白上构建成完全抗原之后方可用来免疫实验动物。本实验先用4-二甲氨基吡啶(DMAP)作为催化剂使展青霉素分别与戊二酐酸(HG)和丁二酐酸(HS)反应，生成展青霉素-戊二酐酸(PAT-HG)和展青霉素-丁二酐酸(PAT-HS)。合成结果经液相色谱-质谱联机(HPLC-MS)鉴定成功。修饰之后的展青霉素使用1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀亚胺(NHS)作为偶联剂，分别选用牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)为蛋白载体，制备了PAT-HS-BSA和PAT-HG-OVA人工合成完全抗原，并使用紫外光谱分析和SDS-PAGE进行鉴定。鉴定结果显示人工完全抗原偶联成功，可用于动物免疫制备相应抗体。 2.展青霉素抗体的制备及鉴定 为获得抗展青霉素特异性抗体，本研究使用所制备的人工完全抗原PAT-HS-BSA对Balb/C小鼠进行免疫，以弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂为免疫佐剂，采用背部皮下多点注射的方式，共免疫五次。五免后小鼠抗体效价稳定在1∶1600，成功制备得到抗展青霉素多克隆抗体。之后尝试制备展青霉素单克隆抗体，取冲击免疫后的小鼠，分离得到其脾细胞，并与骨髓瘤细胞SP2/0按照传统细胞生物学方法进行融合，运用间接ELISA检测方法进行筛选，共计细胞融合和筛选两次，未筛选出阳性细胞株。 3.免疫后鼠源核糖体展示大容量单链抗体基因文库的构建及鉴定 为构建鼠源核糖体展示（ribosome display，RD）单链抗体(single chainvariable fragments，scFv)文库，本实验以展青霉素人工完全抗原免疫后的小鼠脾脏为实验材料。提取其总RNA，反转录为cDNA，分别设计引物扩增鼠源抗体的VH、VL和Ck基因，采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术，通过Linker((Gly4Ser)3)进行拼接，构建了单链抗体scFv基因文库和核糖体展示基因文库;经鉴定，所构建的文库中基因长度约为1100 bp，库容量约4.3×1013，文库中的基因序列具有较好的多样性和完整性。本试验成功构建了免疫后鼠源核糖体展示大容量单链抗体基因文库，为进一步筛选特异性单链抗体奠定了基础。 综上所述，本研究在成功合成人工完全抗原的基础上制备了抗展青霉素多克隆抗体，同时成功构建了免疫后鼠源核糖体展示单链抗体基因文库，为展青霉素免疫学检测方法的建立奠定了基础。