论文部分内容阅读
春兰(Cymbidium goeringii Rchb.f.)是一种具有很高观赏性价值的兰科兰属植物,传统上采用分株繁殖。随着现代生物技术的发展,以组织培养为主要手段的生物技术逐步应用到春兰的繁殖过程中,大幅度的提高了春兰的繁殖系数。而对春兰种质资源的遗传多样性研究,则有利于春兰种质资源的收集、保存、鉴定、创新和合理利用。本研究在春兰的离体培养和遗传多样性等领域开展了工作,以期为遗传改良和资源的开发利用提供理论指导和构筑技术平台。取得的结果如下:1建立和优化了春兰种子培养技术体系对春兰种子进行了非共生萌发研究,结果发现:果龄、灭菌方式、赤霉素预处理、基本培养基、碳源及添加植物生长调节剂等因子对种子的萌发率有很大的影响。适合春兰种子萌发的最佳培养基为:MS+NAA(1.0mg/L)+6-BA(1.0mg/L)+GA(1.5mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂(0.7%)。首次较为全面对影响种子萌发的多个因素进行探讨,完善了春兰组织培养体系。2建立和优化了兰属植物RAPD-PCR实验体系对影响RAPD-PCR的Mg2+、dNTPs、Taq酶及引物浓度等因子进行了优化。确定优化的反应体系为:75ng模板DNA,2.5mmol/L Mg2+,0.15mmol/L dNTPs,0.75 U Taq酶,0.4μmol/L引物浓度,反应总体积为25μL。3春兰及其近缘种的形态学、RAPD分析采用35个形态学性状分析表明,12种/类型兰属植物可聚为3类,其中墨兰和寒兰组成1类,珍珠矮和兔耳兰组合为另1类,而包括春兰在内的其他兰属近缘种为第3类;以筛选出的23个随机引物扩增的RAPD标记,可将供试样品聚为5类,其中春兰、建兰、莎叶兰、莲瓣兰、菅草兰及春剑为第1类,墨兰和寒兰聚为第2类,珍珠矮和兔耳兰为第3类,惠兰与落叶兰单独各成一类。4春兰不同自然分布区遗传多样性的RAPD评价用筛选出的多态性表现较好的48个引物进行RAPD扩增,共产生了324条600-3,000bp条带,平均每个引物可产生6.8条,其中201条(62.04%)显示多态性;样品的遗传差异性大小与地理距离的远近表现出很大的相关性,样品之间亲缘关系的远近有着一定程度的地域趋势。