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目的:以人急性髓性白血病细胞为研究对象,探究900MHz微波辐射是否能引起线粒体损伤,这种损伤是否是通过提高细胞活性氧水平,降低线粒体内mt-TFA和Poly-γ蛋白水平而诱发的。方法:1.900MHz微波辐射对人急性髓性白血病细胞线粒体的影响将对数生长期的人急性髓性白血病细胞分为以下4组:对照组、假暴露组(置于微波照射装置中,不给予微波照射,4h/d,连续5d)、微波照射组(120μW/cm2,900MHz微波照射,4h/d,连续5d)、γ射线组(6Gy 60Co-γ射线照射,剂量率0.376Gy/min),照射结束后30分钟、4小时和24小时收集细胞,用流式细胞仪检测ROS水平,多功能酶标仪检测ATP含量,RT-PCR检测mtDNA拷贝数和mtDNA转录水平。2.活性氧在900MHz微波辐射诱导人急性髓性白血病细胞线粒体损伤中的作用将对数生长期的人急性髓性白血病细胞分为以下8组:对照组、假暴露组(置于微波照射装置中,不给予微波照射,4h/d,连续5d)、微波照射组(120μW/cm2,900MHz微波照射,4h/d,连续5d)、γ射线组(6Gy 60Co-γ射线照射,剂量率0.376Gy/min)、褪黑素组(给予细胞1000nM褪黑素处理4小时)、褪黑素+假照射组(预先采用1000nM褪黑素处理细胞4小时,然后将细胞放置在辐照装置中,但不给予微波照射,4h/d,连续5d)、褪黑素+微波组(预先采用1000nM褪黑素处理细胞4小时,然后给予120μW/cm2,900MHz微波照射,4h/d,连续5d)、褪黑素+γ射线照射组(预先采用1000nM褪黑素处理细胞4小时,然后给予60Co-γ射线照射,剂量为6Gy,剂量率为0.376 Gy/min),照射结束后30分钟、4小时和24小时收集细胞,检测各组细胞ROS水平,ATP含量,mtDNA拷贝数和mtDNA转录水平。3.900MHz微波辐射诱导人急性髓性白血病细胞mtDNA的损伤及其机制将对数生长期的人急性髓性白血病细胞分为以下8组:对照组、假暴露组(置于微波照射装置中,不给予微波照射,4h/d,连续5d)、微波照射组(120μW/cm2,900MHz微波照射,4h/d,连续5d)、γ射线组(6Gy 60Co-γ射线照射,剂量率0.376Gy/min)、褪黑素组(给予细胞1000nM褪黑素处理)、褪黑素+假照射组(预先采用1000nM褪黑素处理细胞4小时,然后放置在辐照装置中,但不给予微波照射,4h/d,连续5d)、褪黑素+微波组(预先采用1000nM褪黑素处理细胞4小时,然后给予120μW/cm2,900MHz微波照射,4h/d,连续5d)、褪黑素+γ射线照射组(预先采用1000nM褪黑素处理细胞4小时,然后给予60Co-γ射线照射,剂量为6Gy,剂量率为0.376 Gy/min),照射结束后30分钟、4小时和24小时收集细胞,用多功能酶标仪检测8-OHdG含量,Western Blot检测mt-TFA和poly-γ蛋白表达水平。结果:1.900MHz微波辐射对人急性髓性白血病细胞线粒体的影响(1)与对照组相比,假暴露组ROS水平、ATP含量、mtDNA拷贝数和mtDNA转录水平均无明显变化(P>0.05);(2)与对照组相比,微波组在微波照射后30分钟和4小时,细胞ROS水平显著增加(P<0.05),随着时间推移ROS水平呈下降趋势,在微波照射后24小时,细胞ROS水平降至对照组水平(P>0.05);(3)与对照组相比,微波照射组ATP含量在照射后30分钟明显低于对照组(P<0.05),随着时间推移ATP含量呈上升趋势,但在照射后4小时和24小时,ATP含量仍低于对照组(P<0.05);(4)与对照组相比,微波照射组mtDNA拷贝数在照射后30分钟明显低于对照组(P<0.05),随着时间推移mtDNA拷贝数呈上升趋势,但在照射后4小时和24小时,mtDNA拷贝数仍低于对照组(P<0.05);(5)对照组相比,微波照射组mtDNA转录水平(ND1和16S)在照射后30分钟和4小时mtDNA转录水平(ND1和16S)显著降低(P<0.05);随着时间推移mtDNA转录水平(ND1和16S)呈上升趋势,在照射后24小时,mt DNA ND1转录水平仍低于对照组(P<0.05),16S转录水平升高至对照组水平(P>0.05)。结果表明900MHz微波辐射能诱导人急性髓性白血病细胞内ROS水平的升高,细胞内ATP含量显著降低,mtDNA出现损伤,体现为mtDNA拷贝数和mtDNA转录水平降低,说明微波辐射可能通过氧化应激对线粒体功能造成影响。2.活性氧在900MHz微波辐射诱导人急性髓性白血病细胞线粒体损伤中的作用与对照组相比,微波组ROS水平明显升高(P<0.05),ATP含量、mtDNA拷贝数和mtDNA转录水平均明显降低(P<0.05);与单独微波组相比,褪黑素+微波照射组在微波暴露前预先用褪黑素处理细胞4小时,在照射后30分钟、4小时和24小时,细胞内ROS水平明显降低,而ATP含量、mtDNA拷贝数和mtDNA转录水平均明显升高(P<0.05)。结果表明900MHz微波辐射能够引起白血病细胞线粒体氧化损伤,而抗氧化剂褪黑素能够有效抑制微波辐射能诱导的ROS产生,以及ROS升高所介导的线粒体损伤,说明900MHz微波辐射致mtDNA损伤可能是通过ROS介导的。3.900MHz微波辐射诱导人急性髓性白血病细胞mtDNA的损伤及其机制(1)与对照组相比,假暴露组细胞线粒体中8-OHdG含量和mt-TFA/poly-γ蛋白表达水平均无明显变化(P>0.05);(2)与对照组相比,微波组在微波照射暴露后30分钟和4小时,细胞线粒体中8-OHdG含量显著增加(P<0.05),随着时间推移8-OHdG含量呈下降趋势,但在微波暴露后24小时,8-OHdG含量仍高于对照组水平(P<0.05);与单独微波照射组相比,褪黑素+微波照射组细胞在微波暴露前预先用褪黑素处理4小时,在照射后30分钟、4小时和24小时,细胞线粒体中8-OHdG含量显著降低(P<0.05);(3)与对照组相比,微波组在微波照射暴露后30分钟和4小时,细胞中mt-TFA/poly-γ蛋白表达水平显著降低(P<0.05),随着时间推移细胞中mt-TFA/poly-γ蛋白表达水平呈上升趋势,但在微波暴露后24小时,细胞中mt-TFA/poly-γ蛋白表达水平仍低于对照组水平(P<0.05);与单独微波照射组相比,褪黑素+微波照射组细胞在微波暴露前预先用褪黑素处理4小时,在照射后30分钟、4小时和24小时,细胞中mt-TFA/poly-γ蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。微波辐射组细胞线粒体中8-OHd G含量显著升高,表明微波辐射可以引起mtDNA氧化损伤,这种损伤可能是线粒体蛋白mt-TFA和poly-γ表达下降所引起的;而抗氧化剂褪黑素则能有效清除ROS,提高mt-TFA和poly-γ蛋白表达水平,同时缓解mtDNA氧化损伤,线粒体内8-OHd G含量降低。结论:1.900MHz微波辐射能够对人急性髓性白血病细胞线粒体造成损伤,这种损伤是由ROS介导的,具体体现为ATP含量下降,mtDNA损伤程度增加;抗氧化剂褪黑素能有效拮抗900MHz微波辐射对人急性髓性白血病细胞线粒体的氧化损伤。2.900MHz微波辐射通过ROS依赖通路改变mtDNA复制及修复因子mt-TFA和poly-γ蛋白表达水平,影响mtDNA数量和完整性,从而引起人急性髓性白血病细胞mtDNA氧化损伤,8-OHdG含量增加。