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目的回乳抑增一号方(下简称"HRYZ")是我院的临床经验方,具有回乳消胀、软坚散结,化痰通络,行气活血之功效,主要用于治疗妇女溢乳,乳癖结块、乳房胀痛,疗效确切,但原方剂药理作用尚未得到验证。本研究利用现代药理学研究方法,通过观察HRYZ对HPRL和乳腺增生两种模型大鼠的治疗作用,探讨该药治疗两病的作用机理,为其在临床上的应用及进一步的制剂开发提供可靠的实验依据。方法选用雌性未孕Wistar大鼠,背部皮下注射盐酸甲氧氯普胺注射液5天造成高泌乳素血症模型。动物分为正常组、模型组、溴隐亭阳性药组、回乳抑增一号高、中和低剂量组。造模成功后,阳性药组给溴隐亭,剂量为0.393mg.kg-1·d-1;回乳抑增一号高、中、低剂量组分别按31.6g·kg-1·d-1、15.8g·kg-1·d-1、7.9g·kg-1·d-1剂量给予回乳抑增一号。正常组和模型组给等容量的蒸馏水,每日1次,每次2ml,连续20天。末次给药24小时后,于次日采用摘眼球取血检测。应用ELISA法检测血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)的含量,观察回乳抑增一号对HPRL大鼠的治疗效果。选用雌性未孕Wistar大鼠,在大鼠后腿内侧肌肉注射苯甲酸雌二醇注射液0.5mg/kg/d,连续25天,继而肌注黄体酮注射液5mg/kg/d,连续5天,造成乳腺增生疾病模型;在疾病模型的基础上,用鼠夹夹住一只大鼠的尾巴,使其与其他大鼠厮打,每次刺激30分钟,每天刺激1次,连续25天,造成乳腺增生伴有肝郁症模型(简称病症结合模型组)。动物分为正常组、疾病模型组、病症结合模型组、三苯氧胺阳性药组、乳癖散结阳性药组、回乳抑增一号高、中和低剂量组。成功造模后,正常组、疾病模型组和病症结合模型组大鼠灌胃蒸馏水(2mL/次),三苯氧胺阳性药组大鼠按1.65mg/kg的剂量灌胃三苯氧胺溶液,乳癖散结阳性药组大鼠按0.52g/kg的剂量灌胃乳癖散结溶液,回乳抑增一号高、中和低剂量组大鼠分别按33.1g/kg、16.55g/kg、8.28g/kg的剂量灌胃回乳抑增一号汤剂,每天1次,连续30天。末次给药24小时后,取血检测用ELISA法检测各组大鼠血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、促性腺激素释放激素(GnRH)、5-羟色胺(5-HT)的含量;观察各组大鼠乳腺组织病理学变化。从以上多角度多方面研究回乳抑增一号治疗乳腺增生的作用机制。选用雌性未孕Wistar大鼠,随机分为正常组、HPRL模型组、乳腺增生模型组、混合模型(乳腺增生伴随HPRL)组。制备10只HPRL大鼠模型,取其乳腺组织,制备成病理切片,显微镜下观察是否出现乳腺增生以及增生程度;制备10只乳腺增生大鼠模型,用ELISA试剂盒检测其血清中E2、P、PRL激素的含量。将10只大鼠先注射苯甲酸雌二醇和黄体酮,制备成乳腺增生模型后,再注射盐酸甲氧氯普胺注射液5天,制备成混合模型大鼠。取其乳腺组织观察乳腺增生情况,同时用ELISA试剂盒检测其血清中E2、P、PRL激素的含量,观察两病能否同时出现及其激素变化规律。将回乳抑增一号复方水煎溶液、麦芽、浙贝母、牡蛎、昆布、夏枯草、白芥子、山慈菇、玄参、丹参、郁金各单味药水煎溶液,分别进高效液相色谱仪,建立HPLC色谱图。研究复方及方中各单味药水煎剂的差异,寻找方中主要药味化学成分的变化规律。结果1、与正常组比较,模型组大鼠血清PRL水平明显升高(P<0.05),说明大鼠高泌乳素血症模型制备成功,E2、P、FSH值明显下降(P<0.05),LH值变化不明显。回乳抑增一号中剂量组和低剂量组大鼠血清PRL水平明显下降,与疾病模型组有显著差异(P<0.05),且低剂量组接近正常组水平。回乳抑增一号中剂量组与模型组相比,E2、P、FSH水平显著提高,均接近正常组水平,治疗效果最好。2、乳腺增生疾病模型和病症结合模型均制备成功,表现为血清E2、PRL、FSH、GnRH和5-HT显著升高,P显著降低;而且乳腺组织腺泡和小叶增生严重,分泌物增多。经灌胃高剂量回乳抑增一号后,乳腺增生大鼠血清E2、PRL、FSH、GnRH和5-HT含量均显著降低(P<0.05),P含量显著升高(P<0.05);乳腺病理切片显示腺泡增生减轻,分泌物减少,增生程度大幅减轻,效果与阳性药三苯氧胺类似,疗效确切。3、10只HPRL大鼠的乳腺组织,发现腺泡轻度增生,存在少量分泌物,出现轻度乳腺增生(Ⅰ级或Ⅱ级)。10只乳腺增生大鼠的血清,发现其PRL均升高,与正常组相比有显著性差异。混合模型制备后,发现PRL、P显著升高,E2显著降低,乳腺组织腺泡大量增生,分泌物增多,乳腺增生严重。说明混合模型(乳腺增生伴随HPRL)大鼠成功制备,两病均存在。25天后,再次检测血清激素和乳腺组织,发现PRL、E2显著升高,P显著降低,乳腺组织腺泡大量增生,分泌物增多,乳腺增生严重。说明混合模型依旧存在。4、回乳抑增一号HPLC色谱图中,第1、3号峰来源于麦芽;第2、4、5号峰主要来源于夏枯草;第6、7号峰主要来源于白芥子;第9、10、12、13号峰主要来源于丹参,其中第13号峰为丹参酮ⅡA;第15号峰来自于玄参。但复方中第8号共有峰在夏枯草与白芥子单味药材图谱中均出现,第11号共有峰在玄参、夏枯草和丹参单味药材图谱中均出现;而第14号峰暂无归属。在相同药材剂量条件下,来源于丹参的丹参酮ⅡA色谱峰在复方中显著高于单味药材;来源于白芥子的第6号峰、来源于夏枯草的第4、5号峰在复方中也显著高于单味药材;但由白芥子贡献的第7号峰峰高及峰面积在复方中却显著低于单味药材。表明各单味药材对复方指纹图谱的贡献程度有差异。