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目的：(1)建立尘螨哮喘小鼠模型并观察模型T-bet、GATA-3、Foxp3蛋白的表达情况.(2)探讨T-bet、GATA-3、Foxp3与Th1/Th2平衡、气道炎症形成的关系.(3)研究CpGODN对气道炎症、Th1/Th2平衡的调控作用及其对T-bet、GATA-3、Foxp3蛋白表达的影响.(4)观察吸入糖皮质激素对哮喘气道炎症、Th1/Th2平衡的影响.
方法：30只雌性C57BL/6J小鼠(6-8周龄)按体重大小随机分为5组:正常对照组(A组),哮喘模型组(B组),GpCODN对照组(C组),CpGODN治疗组(D组),布地奈德组(E组),每组6只.正常组用生理盐水0.2ml,其他实验组用尘螨抗原/氢氧化铝(20 μg/5mg)0.2ml于d1、d10腹腔注射致敏,CpGODN治疗组每次致敏时,CpGODN 20 μg与尘螨抗原混合腹腔注射,GpCODN治疗对照组每次致敏时,GpCODN20 μg与尘螨抗原混合腹腔注射.d17开始激发,隔日一次,共7次,正常组用生理盐水50 u l滴鼻激发,其余组用尘螨抗原/生理盐水(20 u g/50u l)滴鼻激发,布地奈德组每次激发前1小时雾化布地奈德混悬液30min.末次激发后24小时处死小鼠,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比(EOS﹪)的变化,用酶联免疫吸附测(ELISA)法检测BALF中IL-4、IL-5、IL-γ、IL-10、TGF-β 1的含量变化;取肺组织作病理检测在光镜、电镜下观察小鼠气道炎症情况;免疫组化染色观察CpGODN对尘螨过敏性哮喘小鼠模型肺部T-bet/GATA-3表达的影响;用免疫印迹(western-blot)法检测肺组织中T-bet、GATA-3、Foxp3蛋白的表达水平的变化.
结果：(1)BALF中的炎症细胞:各组BALF细胞总数、EOS绝对值计数、EOS占细胞总数的百分比(EOS﹪)的比较,B组显著高于A组(均为P<0.01);D组、E组显著低于B组(均为P<0.01),C组显著高于D组(均为P<0.01).
(2)肺组织病理改变:B组小鼠肺细织切片HE染色可见支气管及血管周围炎性细胞浸润,以EOS、淋巴细胞和中性粒细胞为主,支气管上皮多处断裂,并有基底膜增厚和平滑肌肥大增生等表现.AB-PAS染色气道腔内可见大量黏液栓,杯状细胞增生,甲苯胺蓝法染色可见大量的肥大细胞及其颗粒.D组和E组的上述改变程度不一,明显比B组的改变轻.C组比D组的改变明显.A组则无上述表现.
(3)肺组织超微结构:电镜下A组(正常对照组)显示正常的肺泡隔和肺泡Ⅱ型上皮细胞,支气管纤毛上皮细胞纤毛排列整齐;B组肺泡隔明显增厚,炎症细胞增多,结果(1)10位健康者分别使用CNE和SFE在伸指总肌各获得200个动作电位对.CNE记录所得200个动作电位对的平均Jiggle值为29.35±8.82us,SFE记录所得200个动作电位对平均Jitter值为29.00±8.52us(p=0.69).10位健康者平均Jiggle为29.16±4.64us,平均Jitter为29.00±4.50us(p=0.94).健康者没有发现阻滞.健康者CNE记录的Jiggle与SFE记录的jitter相近,具有可比性.(2)9位重症肌无力患者184个动作电位对的平均Jiggle值为80.74±56.62us,平均Jitter值为81.57±50.80us(p=0.88),9位患者平均Jiggle值为81.01±16.27us,平均jitter值为81.89±17.81us(p=0.92),MG患者CNE记录的Jiggle与SFE记录的Jitter也具有可比性.
(4)10位健康者和9位重症肌无力患者单纤维肌电图结果见表1、表2(4)10位健康者SFE记录的200对电位中,13对(6.50﹪)MSD(平均分类数据差,mean sorted-data difference)代替MCD(连续IPI差值的均数即连续差均值,mean consecutive difference)计算Jitter值,CNE记录的200对电位中17对(8.50﹪)MSD代替MCD计算Jiggle值:9例MG患者,SFE记录的184对电位中,24对(13.04﹪)MSD代替MCD计算Jitter值,CNE记录的184对电位中,56对(30.43﹪)MSD代替MCD计算Jiggle值.
(5)10位健康者CNE记录时,平均放电频率为15.61±6.37,记录的平均电位数目为1.61±0.61;而SFE记录时,平均放电频率为16.71±6.59,记录的平均电位数目为1.38±0.49.CNE记录的放电频率低于SFE,但两者间差异无统计学意义(P=0.08),CNE记录的电位对多于SFE,两者间有显著性差异(P<0.001).
(6)9例MG患者CNE记录时,平均放电频率为13.05±3.47,记录的平均电位数目为1.46±0.56;而SFE记录时,平均放电频率为14.88±3.78,记录的平均电位数目为1.33±0.47.CNE记录的放电频率低于SFE,两者间差异有显著性(P<0.001),CNE记录的电位对多于SFE,两者间有显著性差异(P<0.05).
(7)53例重症肌无力患者使用CNE共获得1065对动作电位,每对动作电位的平均Jiggle值为67.13±58.63us,阻滞电位共131对,占12.30﹪(131/1065).53例患者的平均Jiggle值为67.15±35.05us,28例发现阻滞,占52.83﹪(28/53).
(8)53例重症肌无力患者中,Jiggle异常者44例,阳性率为83.02﹪(44/53);正常9例,占16.98﹪(9/53).Jiggle正常的9例患者,其中8例为眼肌型重症肌无力,1例为在疾病缓解期的全身型重症肌无力.22例眼肌型患者,Jiggle异常14例,阳性率为63.64﹪(14/22),4例发生阻滞,占18.18﹪(4/22),阻滞电位共13对.31例全身型患者,Jiggle异常30例,阳性率为96.77﹪(30/31).24例发生阻滞,占77.42﹪(24/31),阻滞电位共118对.
结论：(1)使用CNE代替SFE评价神经肌肉接头功能是可行的.(2)在重症肌无力诊断中,CNE-SFEMG与SFE-SFEMG的诊断敏感性相仿. (3)CNE-SFEMG技术与传统的SPE-SFEMG比较比较具有价格低廉、安全、电位容易获得等优点,更利于在临床推广应用.