目的幽门螺杆菌感染是胃癌发生的主要原因之一,可干扰胃黏膜屏障,而黏蛋白能润滑和保护胃黏膜,同时还参与了细胞信号传导、细胞周期变化和胃黏膜恶性转化等过程。越来越多的研究表明在幽门螺杆菌感染时胃黏蛋白的表达发生变化,但对幽门螺杆菌诱导胃癌细胞中黏蛋白表达变化的确切机制却知之甚少。故本研究探讨幽门螺杆菌毒力因子Cag A和尿素酶代谢物NH4+对人胃癌AGS细胞中黏蛋白的表达变化的影响,以更加明确胃癌的发生机制,为胃癌的诊治提供新思路。方法Cag A过表达质粒转染至人胃癌AGS细胞株,并将AGS细胞分为转染Cag A质粒(p CDNA3.1-Cag A)组、转染空白质粒(p CDNA3.1)组和未转染质粒(CK)组,用q PCR检测三组细胞中Cag A m RNA和黏蛋白MUC2、MUC5AC、MUC6、MUC5Bm RNA的表达水平,Western Blot验证Cag A蛋白表达情况,并采用免疫荧光检测黏蛋白MUC2、MUC5AC,MUC6,MUC5B蛋白的表达情况。用0、5、10、15、20mmol/L浓度的氯化铵处理人胃癌AGS细胞和转染Cag A质粒的AGS细胞,然后分别用定量PCR和免疫荧光检测黏蛋白MUC2、MUC5AC、MUC6、MUC5Bm RNA和蛋白的表达情况。结果1.三组进行两两比较,Cag A m RNA和Cag A蛋白仅在p CDNA3.1-Cag A组有表达,而在CK组和p CDNA3.1组细胞中无表达:p CDNA3.1-Cag Avsp CDNA3.1(p≦0.05);p CDNA3.1-Cag Avs CK(p≦0.05)。2.p CDNA3.1-Cag A组中MUC5AC、MUC2、MUC5B表达水平显著高于p CDNA3.1组(p<0.05)和CK组(p<0.01);p CDNA3.1-Cag A组中MUC6 m RNA表达高于p CDNA3.1(p<0.01),而与CK组相似(p>0.05)。3.AGS细胞中黏蛋白MUC5AC、MUC6和MUC2m RNA表达量随着NH4+浓度的增加而增加,直到15mmol/L达到峰值,且显著高于在未经铵离子处理的AGS细胞(p<0.01;p<0.01;p<0.01)。在NH4+浓度为15mmol/L时MUC5Bm RNA的表达明显高于其他NH4+浓度下的表达(p<0.05)。4.转染Cag A的AGS细胞中黏蛋白MUC5AC、MUC2和MUC6 m RNA的表达水平在NH4+15mmol/L时明显高于0mmol/L(p<0.01;p<0.05;p<0.05)。MUC5B m RNA的表达随着NH4+浓度的增加而增加,并明显高于NH4+0 mmol/L时的表达(p<0.01)。5.免疫荧光分析证实了上述结果。结论1.Cag A过表达显著上调AGS细胞中MUC2、MUC5AC和MUC5B表达,但不影响MUC6表达。2.尿素酶代谢物NH4+影响AGS细胞中MUC2、MUC5AC、MUC5B和MUC6的表达。3.Hp可能通过毒力因子Cag A和/或者尿素酶代谢物NH4+影响AGS细胞中MUC2、MUC5AC、MUC5B和MUC6的表达。