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目的:利用卵蛋白(OVA)复制小鼠哮喘模型,并进行激素干预治疗来制作激素依赖性哮喘小鼠模型,在撤减激素过程中,以五紫三黄方干预治疗,观察五紫三黄方对激素依赖性哮喘的疗效,探讨激素依赖性哮喘的发病机制和五紫三黄方治疗激素依赖性哮喘的作用机理。方法:小鼠雌雄各半120只,体重18±5 g,以随机数字表法分为:空白组、模型组、泼尼松对照组、五紫三黄方低剂量组、五紫三黄方中剂量组、五紫三黄方高剂量组,每组均为20只。将小鼠置于屏障级动物室中喂养1周。模型组、泼尼松对照组组、五紫三黄方低、中、高剂量组小鼠于第1,7,14天给予腹腔注射00μg卵蛋白+2 mg氢氧化铝凝胶,用生理盐水稀释到0.1 ml。第21天开始用1%卵蛋白雾化激发,通过人工调节雾化量使雾化吸入箱里卵蛋白颗粒浓度维持在10-20mg/m3之间,1次/d,30 min/次,连续7天,其后每隔3天雾化1次,共雾化18次。空白组小鼠用生理盐水腹腔注射和雾化。每次雾化前模型组、泼尼松对照组组、五紫三黄方低、中、高剂量组小鼠给予3.9 mg/kg泼尼松灌胃,共灌服21天。造模第42天开始撤减激素用量,按照每两天泼尼松0.325mg/kg速度递减,于第63天强的松全部撤离。同时从第35天常规灌胃方法给五紫三黄方低、中、高剂量组灌服五紫三黄方配方颗粒,每日一次。按照每100g体重给药lml的标准配制药品。每周称量小鼠体重,根据体重变化调整给药剂量。中药组:人的五紫三黄方给药剂量为药粉30.673g/d,小鼠用药取相当于成人的等效剂量,五紫三黄方颗粒3.988g/kg体重,相当于生药22.23g/kg体重,药液浓度2.223g/ml。模型组和正常组给予等体积的生理盐水,给药至动物处理前一日。于第64天,小鼠断头动脉取血2m1,离心分离血浆,放射免疫法测定各组小鼠血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(COR)含量的变化。处死小鼠在无菌条件下剪开胸腔,取相同部位的肺组织,放入12%中性福尔马林内浸泡固定,待进行HE染色,在光学显微镜下观察小鼠肺脏的组织形态结构,自动成像系统彩图拍照。免疫组化,检测肺组织上皮细胞ICAM-1表达,肺组织匀浆,检测嗜酸性粒细胞趋化活化因子(Eotaxin)和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)。结果:血浆CRH、ACTH和COR含量结果:哮喘模型组与正常组血浆CRH、ACTH和COR含量比较差异无显著性意义(P>0.05)。醋酸泼尼松对照组与模型组比较,血浆CRH、ACTH和COR含量明显降低,差异有非常显著性意义(P<0.01)。说明醋酸泼尼松治疗哮喘会导致哮喘小鼠模型的血浆CRH、ACTH和COR含量降低;五紫三黄方低、中、高剂量组与醋酸泼尼松对照组比较,五紫三黄方各组血浆CRH、ACTH和COR含量明显升高,差异有非常显著性意义(P<0.01)。五紫三黄方高剂量组与低,中剂量组比较,五紫三黄方高剂量组血浆CRH、ACTH和COR含量较低,中剂量组升高明显,差异有非常显著性意义(P<0.01)。HE染色结果:正常组支气管肺组织形态无明显变化,无炎性细胞浸润。模型组支气管上皮及管壁增厚,上皮破坏和脱落明显,管腔明显狭窄,杯状细胞增生明显,支气管管腔可见粘液栓阻塞,腔内大量炎性分泌物,大中气道和血管周围可见大量的嗜酸细胞和淋巴细胞浸润,支气管和血管平滑肌轻度增生,可见吞噬细胞增多,肺泡间隔明显增宽。激素组对照组支气管上皮及管壁增厚,上皮可见部分破坏和脱落,管腔狭窄,管腔内可见轻度至中度炎性浸润,杯状细胞增生较模型组减轻,大中气道和血管周围可见嗜酸细胞和淋巴细胞浸润,但与模型组比较起来,炎症明显减轻,支气管和血管平滑肌轻度增生,肺泡间隔增宽。中药小剂量组支气管管腔基本正常,上皮轻度增生,有少量破坏脱落,管腔未见明显狭窄,有少量炎症,杯状细胞增生较对照组减轻,支气管周围有少量淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润灶,支气管和血管平滑肌轻度增生,肺泡间隔轻度增宽。中药中剂量组支气管管腔基本正常,上皮轻度增生,未见明显破坏脱落,管腔未见明显狭窄,有少量炎症,杯状细胞增生较对照组减轻,支气管周围有少量淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润灶,支气管和血管平滑肌无明显增生,肺泡间隔无明显增宽。中药高剂量组支气管管腔基本正常,上皮无明显增生,上皮无明显破坏脱落,管腔未见明显狭窄,有少量炎症,杯状细胞较中药中剂量组减少,支气管周围未见淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润灶,支气管和血管平滑肌无明显增生,肺泡间隔无明显增宽。免疫组化检测肺组织上皮细胞ICAM-1表达结果:与正常组比较,哮喘模型组肺组织上皮细胞ICAM-1表达明显增强(P<0.01),与哮喘模型组比较,醋酸泼尼松能使肺组织上皮细胞ICAM-1表达明显降低(P<0.01);与哮喘模型组和醋酸泼尼松组比较,五紫三黄方低、中、高剂量组能明显降低肺组织上皮细胞ICAM-1表达(P<0.01),且五紫三黄方高剂量组降低肺组织上皮细胞ICAM-1表达更显著(P<0.01)。肺组织匀浆检测嗜酸性粒细胞趋化活化因子(Eotaxin)和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)结果:哮喘模型组与正常组比较,哮喘模型组嗜酸性粒细胞趋化活化因子(Eotaxin)和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)显著性增高,差异有非常显著性意义(P<0.01);醋酸泼尼松对照组与哮喘模型组比较,醋酸泼尼松对照组嗜酸性粒细胞趋化活化因子(Eotaxin)和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)显著性降低,差异有非常显著性意义(P<0.01);五紫三黄方低、中、高剂量组与哮喘模型组比较,五紫三黄方低、中、高剂量组嗜酸性粒细胞趋化活化因子(Eotaxin)和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)显著性降低,且五紫三黄方中、高剂量组降低更明显,差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:1利用卵蛋白(OVA)通过致敏和激发成功复制了支气管哮喘小鼠模型。2激素干预治疗哮喘会使下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的功能受到严重抑制。3利用卵蛋白(OVA)复制的支气管哮喘小鼠模型后期出现不同程度的炎症表现和气道重塑。4五紫三黄方具有明显改善激素醋酸泼尼松干预治疗哮喘小鼠导致的下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的功能受损作用。5经病理学观察发现醋酸泼尼松虽然能明显减轻小鼠哮喘气道炎性细胞的浸润,但并不能改善气道的重塑。6五紫三黄方不仅能明显明显减轻小鼠激素依赖性哮喘气道炎性细胞的浸润,而且能明显改善小鼠哮喘气道的重塑。7通过测肺组织匀浆中嗜酸性粒细胞趋化活化因子(eotaxin)及嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)的含量,表明醋酸泼尼松具有减少哮喘小鼠肺组织内ECP和eotaxin的含量作用。8醋酸泼尼松能使肺组织上皮细胞ICAM-1表达明显降低,提示醋酸泼尼松有减轻气道炎症作用。9醋酸泼尼松干预治疗哮喘小鼠模型,在撤减激素过程中加五紫三黄方治疗,具有明显减少哮喘小鼠肺组织内ECP和eotaxin的含量和能使肺组织上皮细胞ICAM-1表达明显降低作用,且较单纯醋酸泼尼疗效好(P<0.01)。