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目的：构建含有HSV-tk自杀基因逆转录病毒表达载体；研究HSV-tk／GCV系统对人肝癌细胞的体外杀伤作用。 方法：利用重组DNA技术，将HSV-tk基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中，重组质粒pL（tk）SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞，G418筛选，直至出现抗性克隆，扩大培养，用NIH3T3测定病毒滴度，将重组病毒感染人肝癌细胞SMMC-7721，G418筛选出抗性克隆，命名为SMMC／tk，以PCR、RT-PCR对HSV-tk基因修饰的SMMC-7721细胞进行鉴定。通过观察基因修饰细胞生长状况、MTT法及流式细胞仪观察GCV对SMMC／tk细胞的杀伤效应。 结果：经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定，构建的tk基因表达载体pL（tk）SN正确无误；获得高滴度产毒细胞株C34，滴度为1.8×106／ml，PCR及RT-PCR分析证明HSV-tk基因已整合至SMMC／tk细胞基因组中，并在mRNA水平上表达SMMC／tk细胞与未转基因的SMMC／0、SMMC-7721比较，三者的生长速度无明显差别；SMMC／tk细胞对GCV高度敏感，即低浓度GCV（0～1mg／L）处理SMMC／tk细胞7天，可将其大部分杀死，高第四军医大学硕士学位论文浓度GCv（> lmg/L）不能显著增强其对SMMC/tk细胞的杀伤作用。 结论:tk自杀基因逆转录病毒表达载体的成功构建为肝癌的基因治疗提供部分实验基础。人肝癌细胞SMMC一7721对HSV-tk/GCV系统高度敏感，可望为肝癌基因治疗提供有效途径。