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本文在前期研究中,从广东玉米叶片上分离得到嘴突脐霉原菌的菌株ER7,在继代培养中发现菌株ER7的两个子代菌株ER7c和ER7b的产孢性状差异显著,前者继代培养3天后产生大量分生孢子,后者继代10次,培养6个月仍不产生分生孢子。随后,对这3个菌株进行连续继代培养观察,表明三者的产孢性状具有遗传稳定性,同时从形态学和分子水平进行鉴定分析,确证ER7确系ERTc和ER7b的亲代,ITS序列检测表明ER7与ER7c相一致,ER7与ER7b存在一个碱基的差异。三者具有相同的遗传背景,ER7c和ER7b来自同一亲本,两者产孢性状差异明显,该性状差异在继代培养中具有很好的稳定性,这为研究三者的产孢调控蛋白提供了宝贵材料。在本实验中,从蛋白质组分析入手,对嘴突脐霉ER7和ER7c菌株分生孢子以及ER7b菌株菌丝体的蛋白进行提取、分析、制备和生物功能检测。实验中主要采用了如下方法:40mmol/LTris-HCl(pH9-5)裂解,丙酮沉淀,硫酸铵沉淀,乙二醇沉淀等四种蛋白浓缩法; SDS—PAGE垂直电泳法;DEAE—Sepharose FF离子交换柱层析法和S—100凝胶过滤层析法。研究获得如下结论:
(1) 从ER7c菌株分生孢子的蛋白质组中发现了具有产孢调控功能的蛋白,命名为嘴突脐霉产孢调控蛋白 Ersrp(Exserohilum rostratum sporogenous regulatorprotein)。该蛋白存在于嘴突脐霉产孢菌株ER7e的分生孢子中,该蛋白为可溶性蛋白,能通过滴注法透过细胞壁调节不产孢菌株ER7b的菌丝体恢复产孢的特性。
(2) 确立了从嘴突脐霉ER7c菌株分生孢子中制备嘴突脐霉产孢调控蛋白Ersrp的}工艺。
(3) 通过对ER7菌株分生孢子、ER7b菌株菌丝体和ER7c菌株分生孢子蛋白质样品提取方法比较发现,Tris—HCl溶解结合硫酸铵沉淀的方法效果最佳。
(4) 通过SDS—PAGE垂直电泳分析明确了ER7菌株分生孢子、ER7b菌株菌丝体和ER7c菌株分生孢子蛋白质的同源性和差异。
(5)对嘴突脐霉不产孢ER7b菌株菌丝体蛋白组分的初步研究获得重要的结果。