家蚕杆状病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,BmNPV)是一种囊膜包裹的双链环状DNA病毒,是蚕桑养殖业最常见的病害之一,其侵染机制一直都是昆虫病毒学研究领域的热点问题。晚期表达因子3(late expression factor 3,LEF3)是BmNPV编码的DNA单链结合蛋白,在BmNPV侵染过程中,起着重要的调控作用,但乙酰化修饰对其功能的调控作用还未见报道。我们在前期的蛋白质修饰差异组学研究中发现,在BmNPV和家蚕细胞相互作用的过程中,不仅大量宿主蛋白发生乙酰化修饰变化,多种病毒蛋白也发生改变。其中LEF3蛋白是乙酰化修饰变化最为显著的病毒蛋白之一。分析结果显示,在BmNPV感染36 h时,LEF3共有4个赖氨酸(Lys)位点发生乙酰化修饰变化(K18、K27、K325和K326),其中两个位点位于其N端的保守核定位序列中(K18和K27),且K18乙酰化修饰水平上调高达7.4倍。为了深入研究LEF3乙酰化修饰对其功能的影响及其在病毒-宿主相互作用过程中可能的调控作用,本研究以LEF3蛋白为研究对象,通过定点突变、Red重组和Bac-to-Bac重组等技术,分别构建了lef3敲除型和补回型病毒以及Lys位点特异性的定点突变体。荧光分析结果显示LEF3乙酰化修饰导致病毒的增殖能力显著降低。荧光定量q PCR分析结果进一步表明:LEF3的乙酰化修饰可显著降低病毒基因组的复制水平,K18是LEF3关键的乙酰化修饰位点,且可能影响其他三个位点修饰的作用。激光共聚焦显微镜分析结果显示:K18的乙酰化修饰(Kac)可导致LEF3蛋白失去核定位功能,并影响LEF3蛋白与P143蛋白的相互作用。此外,进一步分析LEF3蛋白的乙酰化对家蚕细胞防御系统的影响,结果表明LEF3蛋白K18乙酰化后,Toll样受体4(TLR4)和Spatzle-1的转录水平显著下降,表明LEF3乙酰化修饰可能使病毒的病原性下降,从而降低了病毒对宿主细胞Toll样受体信号通路的激活能力。综上所述,BmNPV LEF3蛋白的乙酰化,尤其是K18的乙酰化,不仅影响LEF3的核定位功能,也影响LEF3与P143的相互作用,进而导致病毒基因组复制能力下降,这有可能是家蚕细胞防御病毒侵染的策略之一。本研究将为进一步深入研究家蚕宿主与BmNPV的互作机制奠定基础,同时也可能为家蚕的抗病毒育种提供新思路。