宫颈癌(cervical cancer, CC)是全球女性中第二位常见的恶性肿瘤,其发病机制尚不清楚。约80%的CC病例发生在发展中国家,在中国每年大约有11万的CC新发病例,大约2-3万人死于该病。人乳头瘤病毒(human papillomaviruses, HPVs)感染已被公认是CC及其癌前病变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)的必要但非充分原因。目前,100多种HPV基因型己被鉴定,其中约40种与生殖道感染相关,依其致癌性的不同可分为高危型(high-risk HPV, HR-HPV)可能高危型和低危型(low-risk HPV,LR-HPV)。HR-HPVs包括HPV 16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68,73和82型；可能高危型包括HPV 26,53和66型；LR-HPV包括HPV 6,11,40,42,43,44,54,61,70,72,81和CP6108型。一些流行病学资料显示,HPV的感染率和型别分布存在区域性差异。此外,预防性病毒颗粒样HPV疫苗的效应具有型特异性。因此,有关某一特定人群HPV感染的最新资料对于宫颈癌的筛查、HPV疫苗的有效研制和评估以及对采取保守治疗的宫颈病变女性的随访均是必需的。目前,关于辽宁地区宫颈病变女性中HPV感染率和型别分布的研究鲜见报道。约80%的女性在其一生中曾感染HPV,而仅一小部分女性最终发展成为CC。因此,除HR-HPV感染之外,CC的发生尚需要其他一些高危因素的存在,例如环境因素,宿主因素,或与病毒相关的因素,包括HPV的型别、整合或病毒载量。HPV DNA在宿主细胞中以三种状态存在：即环状的游离基因,或整合入宿主细胞的DNA中,或二者共存的混合型。目前,HR-HPV DNA在宿主细胞染色体中的整合是一个非常活跃的研究领域。已有的相关研究大多针对世界范围内宫颈癌中最常见的HPV基因型,即16和18型,二者的检出率大约分别占全球CC病例的50%和20%。研究显示,在HPV18阳性的高度宫颈病变和CC标本中病毒DNA几乎均为整合型。而在HPV16阳性的不同宫颈病变中病毒DNA的整合结果却很不一致。此外,有关其它HR-HPV型在CC及其癌前病变中整合状态的研究报道很少。最近一项关于宫颈病变中5种最常见的致癌型HPV (HPV16,18,31,33,和45型)整合状态的研究显示,宫颈病变中HR-HPV的整合率具有型别依赖性。另外,最近研究提示HPV 16型DNA的整合并非一定导致高水平的E6／E7癌基因的表达。因此,有关HPV整合在宫颈癌发生中的作用尚需进一步研究。尽管HPV58在世界范围内通常被认为是很少见的感染型别,但在一些中国人群中其感染率却非常高。最新研究结果显示,HPV16、18和58型在辽宁地区宫颈癌标本中是前三位最常见的感染型别。目前,关于HPV58型在不同宫颈病变中存在状态的研究资料非常有限。而关于HPV18型在高度宫颈病变和CC标本中存在状态的报道几乎均为整合型。因此,本研究将HPV16或58型阳性的不同宫颈病变脱落细胞标本作为研究对象。本研究采用新近引入的凯普导流杂交基因芯片技术(HybriMax)对1444例女性手术前的宫颈脱落细胞标本进行HPV感染的基因分型检测。探讨了辽宁地区进行宫颈癌机会性筛查的女性中不同宫颈病变HPV的感染率和型别分布。此外,我们分析了不同HPV基因型感染与宫颈组织病理学检查结果的相关性以及HybriMax技术对宫颈病变诊断的准确性。另外,本研究采用多重PCR技术对HPV16型阳性(493例)及HPV58型阳性(74例)的不同子宫颈病变女性的宫颈脱落细胞标本进行了HPV整合状态的检测。通过比较不同子宫颈病变中HPV16和58型整合状态的差异,进一步探讨了HR-HPV DNA整合在宫颈癌发生中的作用。材料与方法1、采用导流杂交基因芯片技术对1444例女性的宫颈脱落细胞标本进行HPV基因分型检测,包括经组织病理学确诊的CC 134例,CINⅡ/Ⅲ517例和CINⅠ180例。此外,613例年龄匹配的除外子宫颈瘤变女性的宫颈细胞学标本作为对照组。分析不同宫颈病变中HPV感染的型别分布及不同基因型HPV感染与宫颈病变严重程度的相关性。2、采用多重PCR技术检测493例HPV16阳性的宫颈脱落细胞标本中HPV16型的E2及E6基因,包括经组织病理学确诊的CC 103例,CINⅡ／Ⅲ351例,CINⅠ34例,慢性宫颈炎65例。另外40例排除宫颈病变的正常宫颈细胞学标本作为对照组。通过E2／E6比值法评估HPV16型的体内状态。分析HPV16型的整合及含有HPV16的多型感染与宫颈病变程度的相关性。3、采用多重PCR技术检测73例HPV58阳性的宫颈脱落细胞标本中HPV58型的E2及E6基因,包括经病理证实的CC 7例,CINⅡ／Ⅲ20例,CINⅠ15例,慢性宫颈炎11例及20例经除外宫颈病变的正常宫颈细胞学标本。通过E2／E6比值法评估HPV58型的体内状态。比较不同宫颈病变中HPV58及16型整合状态的差异；分析HPV58型整合与宫颈病变程度的相关性。结果1、在宫颈癌组、CINⅡ／Ⅲ组、CINⅠ组及慢性宫颈炎组中HPV的感染率分别为82.84%,89.56%,70.56%及44.70%。在CINⅢ／Ⅲ病变中前5位常见的基因型(依感染率递减)依次为：HPV 16(61.12%),58(14.12%),33(13.93%),31(8.32%)和52(6.27%)；而在宫颈癌中为HPV 16(73.13%),18(7.46%),58(3.73%)和31／33／39(均为2.24%)。多型HPV感染占研究人群的17.59%,包括2至5种HPV型别。HPV 16型在所有宫颈病变分类中均为最常见的基因型。HPV 16型及单型HR-HPV感染率均随宫颈病变严重性的增加而升高(P=0.000)。2、HPV16型在宫颈癌、CINⅡ/Ⅲ、CINⅠ、慢性宫颈炎及正常宫颈细胞学标本中的整合率分别为67.96%(70／103),21.37%(75／351),8.82%(3／34),7.69%(5／65)和5.00%(2／40)。HPV16型的整合率随宫颈病变严重程度的增加而升高(P=0.000)。含有HPV16的多型HR-HPV感染与宫颈病变的严重程度无相关性,而单型HPV16感染与宫颈病变程度呈正相关(P=0.000)。3、HPV58型在宫颈癌、CINⅡ/Ⅲ、CINⅠ、慢性宫颈炎及正常宫颈细胞学标本中的整合率分别为28.57%(2／7),20.00%(4／20),13.33%(2／15),9.09%(1／11)和10.00%(2／20)。HPV58型的整合率随宫颈病变严重性的增加趋于升高,但差异无统计学意义(P=0.566)。宫颈癌中HPV58型的整合率与HPV16型不同,差异有统计学意义(P=0.047)。结论1、HPV 16,18,58,33和31型感染可能是辽宁地区宫颈癌及其癌前病变的主要高危因素。针对HPV16和18型的预防性疫苗对本地区宫颈癌防护的有效性接近80%。2、HPV 16型的整合在早期宫颈病变(CINⅠ)及正常宫颈细胞中均可能发生。HPV 16型DNA在宿主细胞染色体中的整合明显促进了宫颈病变的恶性进展。HPV 16型感染是宫颈癌发生的最主要危险因素。3、宫颈癌标本中存在相当一部分游离型的HPV16(32.04%)及HPV58(72.43%),提示在HR-HPV感染导致宫颈癌发生的过程中存在另一条不同于E2ORF断裂而导致E6、E7癌基因表达升高的致癌途径。4、HPV58型在宫颈癌标本中的整合形式与HPV16型不同,提示不同HR-HPV感染在宫颈癌发生中的致癌机制可能不同。5、多型HR-HPV感染与宫颈病变的严重程度及HPV16型的整合均无相关性,提示多型HR-HPV感染在宫颈癌发生中可能存在相互拮抗的作用。