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前言 华法林是心脏瓣膜置换术后的常规抗凝治疗药物，长久以来一直以其临床个体化用量差异较大、狭小的临床治疗指数范围和抗凝不适度易引发严重并发症而困扰着临床医生。细胞色素P450是华法林在体内进行氧化代谢的主要酶，其编码基因CYP亚家族中的CYP2C9的SNP（Single Nucleotide Polymorphism）直接影响其酶的活性，并由此而引起患者华法林临床稳定维持量间的显著性差异。现今，对于白种人CYP2C9的SNP的研究结果已有很多报道，但是对黄种人的研究尚处于起步阶段，并存在很大的争议。 本研究着眼于30名汉族心脏病患者CYP2C9的SNP，验证在该实验人群中是否存在文献上已报道的基因突变，并寄希望于找到文献上尚未报道的基因突变。 实验材料与方法 （一）实验对象：临床选取心脏瓣膜置换术后口服华法林达稳定维持量至少一周的汉族患者30名。其中男16名，女14名，平均体重64.7±5.26kg，INR检测值均在2.0～2.5之间，并排除入选患者具有影响华法林代谢的基本因素。 （二）实验方法：每位入选患者抽取外周静脉血1.0ml，以TaKaRa全血DNA提取试剂盒提取DNA，以exon3、exon4及exon7的目标片断为模板进行PCR扩增，然后对扩增产物进行基因测序。 实验结果 1．总体实验操作结果：扩增及测序目标片断共90个，成功率为100％。 2．基因测序结果：30个exon3目标扩增片断中，416位纯合型CGT(Arg144)的基因检出率为100％，杂合型416CGT＞TGT（Arg144Cys）的基因检出率为0。30个exon7目标扩增片断中1 061位纯合型A竹（n、9）的基因检出率为100%，杂合型106lA，I’r>C竹（ne359玩u）的基因检出率为O。30个exon4目标扩增片断中608位及527位杂合型608TTG>GTG（Leu208Val）和527ATr>C竹（nelsl玩u）的基因的检出率皆为100%。561位及537位纯合型561CAG（Glu，92）和537CAT（His;，）的基因检出率为100%，杂合型561CAG>CCG（Glul92Pro）及537CAT>CCT（Hisl84Pro）的基因检出率为0。7个样本表现为584AAA>TGG（ArgZooTI-P）的杂合型基因，检出率为23.3%。 3.实验结果的统计学分析: （l）因在exon4上584AAA>TGG（Ar乒OOTrp）的杂合型基因的检出率为23 .3%，可疑存在有突变，故以此进行分组，查看不同基因型的组间华法林稳定维持量（经体重调整为协扩kg·d）在统计学上的差异性，结果为:无基因突变组的平均华法林稳定维持量为47 .06土12.82林盯kg·d，可疑基因突变组的平均华法林稳定维持量为26.81士9.74协岁kg·d，两组华法林稳定维持量间比较的结果为P<0.01，具有显著的临床差异性。 （2）将30名人选患者按华法林稳定维持量（经体重调整）分为高、中、低剂量3组，并以此检测不同剂量组间的基因优势表型，结果为:3个药物剂量组在基因优势表型上存在显著的统计学差异性（P<0.01）。讨论 细胞色素P450是体内多种内源性及外源性物质代谢的主要氧化酶。其编码基因CYP存在着亚家族现象，其中CYPZCg亚家族的SNP对华法林的代谢起着至关重要的影响作用。到目前为止，白种人的CYPZCg的SNP已有很多报道，并且将CYPZCg分为3个亚型，即CYpZCg*l（A铭144lle359），CYPZCg*2（Cysl，lle359）和CYpZCg*3（A飞l。晚u3，）。但对于黄种人CYPZCg的SNP的研究尚处于起步阶段，并且还存在着很大的争议性。 通过对临床选取的30名汉族患者进行研究，结果表明:30例样本中杂合型基因416CGT>TGT的检出率为O，这与Takahashi的研究结果相符。在exon4上，本研究的结果与Anskar Y.H.，玩ung等人的极为不同。608位及527位杂合型基因6081TG>GTG（玩u208Val）和527ATr>C竹（Ilel81玩u）的检出率皆为100%。561位及537位纯合型基因561CAG ·2·（Glu:。）和537CAT（His:，）的检出率为100%，杂合型基因561CAG>CCG（Glu 1 92Pro）及537CAT>CCT（His184Pro）的检出率为0%。 在本研究中，7个样本表现为584AAA>TGG（A砂00饰）的杂合型基因，检出率为23.3%，可疑为有效突变，故以此基因型对人选患者的华法林稳定维持量进行分组，比较两种基因型在稳定维持量上的不同。结果表明，两种基因型在华法林稳定维持量上存在显著的差异性（P<0.01）。 将30名入选患者按照稳定维持量的不同分为高、中、低剂量3个组，X，检验的结果表明，3组在基因的优势表型上存在显著的差异性（P<0.01）。 综合上述两种结果可以推断，本研究的30名汉族心脏病患者在exon4的584位存在AAA>TGG（A麟ooJ知）的杂合型突变。结论 本研究的30名汉族心脏病患者在CYPZCg基因exon4的584位存在AAA>TGG（A麟oo场）的杂合型突变，并对其临床华法林稳定维持量构成显著性影响。