目的：转化生长因子β1(TGFβ1)在肿瘤的生长、分化、细胞凋亡、细胞外间质形成、肿瘤血管形成及机体抗肿瘤免疫反应等方面发挥重要的调节作用。TGFβ1是正常上皮细胞生长抑制因子，但多数肿瘤细胞抵抗其诱导的生长抑制作用，并表现出有利于肿瘤进展的特性。这主要是由于TGF-β对免疫的抑制作用等所致。因此，抑制TGF-β的功能是机体增强免疫系统清除肿瘤细胞的关键点。国外已有许多研究方法去尝试阻断TGF-β的抑制免疫系统的功能。其中有利用TGF-β的抗体去中和TGF-β，或者利用反义核酸技术封闭TGF-β，但这些方法效果不佳。如果能够抑制TGFβ的分泌并阻断其免疫抑制作用，将会利于控制肿瘤的发展，提高肿瘤的治疗效果。表达的可溶性TGF-β Ⅱ型受体可以像海绵一样吸收肿瘤细胞过表达的TGF-β而不产生信号传导，因此可以有效的封阻TGF-β的生物学作用，打破肿瘤产生的免疫抑制。 材料与方法：根据TβRⅡ胞外区cDNA序列，合成引物。以胚肝RNA逆转录产物为模板，PCR扩增TβRⅡ胞外区基因，克隆到pGEM-T easy质粒载体上。插入片段以EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后，由pGEM-T-easy-TβRⅡ质粒中释放。重组TβRⅡ胞外区cDNA以粘性末段连接方式定向克隆至EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后的原核表达载体pGEX-4T-3质粒，获得表达重组融合蛋白GST-TβRⅡ的原核表达载体TβRⅡ／pGEX-4T-3，并转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中。筛选出含重组子转化菌株，提取质粒DNA做限制性内切酶图谱，DNA序列测定。转化菌以0.1mmol／L IPTG诱导表达，GSH—Agarose纯化重组融合蛋白GST-TβRⅡ。重组蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳、Western印渍分析，检测了重组蛋白的表观分子量和免疫原性。我们分离出外周血淋巴细胞为实验对象，观察重组TβRⅡ蛋白对淋巴细胞转化的作用，检测大肠杆菌表达的重组TβRⅡ蛋白的生物学活性。以淋巴细胞转化实验初步验证了表达产物的体外活性。 天津医科大学博士研究生论文结果:以胚肝RNA逆转录产物为模板，扩增出了499bp的片段。pGEM一T easy一TD Rll质粒经EeoRI和Xhol双酶切后释放出499bp片段。质粒pGEM一T easy经测序，插入片段的序列完全正确。重组融合表达质粒pGEx一4T一3一T p Rll经测序，插入片段大小、位置完全正确。pGEX一4T一3一T日Rll菌株经诱导培养后，SDS~PAGE电泳分析培养液上清。通过与pGEX一4T一3一T p Rll诱导表达前样品和pGEX一4T一3阴性对照菌诱导后样品相比较，发现pGEX一4T一3一T p Rll诱导后培养液样品在54KD处出现新的电泳条带，与理论推测值相符，可以认为是pGEX一4T一3一T p RH分泌表达了目的蛋白。菌株表达产物经Western印迹分析，在相对分子量位置(约54KD)可检测到rhT p Rll蛋白，结果表明重组pGEX一4T一3一T p R 11表达出rhT B R 11蛋白。用rhl’GF pl作为淋巴细胞的抑制因素，观察重组T p RH蛋白对该作用的解救作用。结果表明，体外培养3天后，阳性对照组淋巴细胞转化率(45.3%)，明显低于正常对照组(73.4ry0，P<0.05)。而实验组(74.8%)淋巴细胞转化率与正常对照组无明显差异 (P>0.05)。结果表明，重组T p RH蛋白具有解除由TGFp造成对淋巴细胞功能抑制的作用。讨论:本实验构建了表达重组融合蛋白GST一 T p Rll的原核表达载体T p Rll/pGEX一4T一3，并转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中，成功表达了重组融合蛋白GST~T p Rll，重组T p Rll蛋白具有解除由TGFp造成对淋巴细胞功能抑制的作用。